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復(fù)蘇細(xì)胞收到后收集指南2024/01/02: 復(fù)蘇細(xì)胞收到后收集指南：1、請(qǐng)按照說明書提前準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、因子、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件，提前將生物安全柜進(jìn)行酒精消毒和紫外滅菌。2、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)基渾濁或污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。3、細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí)，在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時(shí)肯定需要提供。4、瓶內(nèi)充液培養(yǎng)基（運(yùn)輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。5、鏡下觀察細(xì)

靜置貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞培養(yǎng)分析2023/12/25: 原代細(xì)胞是從生物體內(nèi)直接分離并在體外培養(yǎng)的細(xì)胞。它們保持了從其來源組織或器官中獲取的特異性和生物學(xué)真實(shí)性。原代細(xì)胞通常具有有限的壽命，因?yàn)樗鼈冊(cè)谂囵B(yǎng)中會(huì)逐漸老化并最終死亡。原代細(xì)胞的培養(yǎng)分析如下：一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養(yǎng)；4、胎牛血清濃度為10%-80%；

實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量PCR方法簡(jiǎn)述2023/12/18: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：1、Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。2、Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)

胎牛血清的質(zhì)量從外觀辨別指引2023/12/11: 如何從三方面外觀辨別胎牛血清的質(zhì)量。1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ迥δ懿睿t細(xì)胞容易破裂。總的來說，國產(chǎn)的

水稻內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒設(shè)計(jì)引物原則2023/12/04: 水稻內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒設(shè)計(jì)引物原則：①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。⑤引物3’端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)

免疫共沉淀(Co-IP)優(yōu)缺點(diǎn)小結(jié)2023/11/28: 以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的proreinA就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是

顆粒培養(yǎng)基使用方法與注意事項(xiàng)2023/11/20: 使用方法：1、取瓶內(nèi)弧菌顯色培養(yǎng)基干粉71.3克，用1000ml蒸餾水或純水溶解，可按比例擴(kuò)增或縮小。攪拌加熱煮沸至*溶解，不需高壓滅菌，冷至約50℃，傾注滅菌平皿。2、以無菌操作取檢樣25g(mL)，加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min均質(zhì)1min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2min，或用Pulsifier脈沖式樣品處理器均質(zhì)30秒，制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500mL的滅菌容器內(nèi)，加225mL3%氯化鈉堿性蛋白

培養(yǎng)微生物6大營養(yǎng)來源解讀2023/11/13: 微生物不是專用于生物分類學(xué)的名詞，而是指一般需借助顯微鏡才能看清的所有微小生物的統(tǒng)稱，數(shù)量龐大且多樣。微生物中的“微”便是它的特點(diǎn)之一，是人眼不能直接看到的，有些微生物只有粉塵那么大，而有些微生物更小，只有在放大幾千倍以上的情況下才能被看見。微生物也是生物，和人一樣，它的存活也需要汲取營養(yǎng)。營養(yǎng)是指生物體從外界環(huán)境中獲取生命活動(dòng)所必須的能量和物質(zhì)，來滿足正常生長和繁殖的需要，它是生物的一種最基本的生理功能，為一切生命活動(dòng)提供所必需的物質(zhì)基礎(chǔ)。而微生物對(duì)營養(yǎng)的需求和動(dòng)植物很接近，其營養(yǎng)來源主要為碳

人彈性蛋白（ELN）檢測(cè)試劑盒應(yīng)用注意事項(xiàng)2023/11/06: 人彈性蛋白（ELN）檢測(cè)試劑盒應(yīng)用注意事項(xiàng)：1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n

科研抗體的制備過程2023/10/30: 抗體的制備過程：1.免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。4.免疫血

小鼠骨髓多能干細(xì)胞培養(yǎng)操作2023/10/23: 小鼠骨髓多能干細(xì)胞培養(yǎng)操作：培養(yǎng)操作：一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2.加1ml消化液（0.25%Trypsi

多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒比色法活性計(jì)算2023/10/17: 測(cè)定原理：PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫，在過氧化物酶存在的條件下與底物顯色，在550nm下有特征吸收峰，通過測(cè)定吸光值增加速率來反映PAO活性。PAO活性計(jì)算：1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝欢x：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。PAO（U/mgprot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.001÷T=333.33×ΔA÷Cpr2、按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝欢x：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。PAO（U/g鮮重）＝

培養(yǎng)基?間歇滅菌與連續(xù)滅菌比較2023/10/08: 培養(yǎng)基間歇滅菌與連續(xù)滅菌比較:1、歇滅菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作要求低，適于手動(dòng)操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的滅菌。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多，滅菌后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的滅菌；發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)滅菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)是滅菌溫度高，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定，滅菌質(zhì)量穩(wěn)定；易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利

原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞培養(yǎng)不同點(diǎn)分析2023/10/05: 區(qū)別一：定義不同原代細(xì)胞培養(yǎng)：原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過程。對(duì)單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。區(qū)別二：特點(diǎn)不同原代細(xì)胞培養(yǎng)：與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。由于培養(yǎng)的細(xì)胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時(shí)也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。傳代細(xì)胞培養(yǎng)

擴(kuò)增曲線的四個(gè)時(shí)期解釋2023/09/25: 擴(kuò)增曲線是描述PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。理論上PCR過程中反應(yīng)產(chǎn)物是以指數(shù)增長的，但隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加，DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反應(yīng)副產(chǎn)物阻礙反應(yīng)等原因，致使PCR的擴(kuò)增效率降低，產(chǎn)物生成的速度逐漸減緩，因此擴(kuò)增曲線是一條“S形”曲線。擴(kuò)增曲線可以分成四個(gè)時(shí)期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺(tái)期。基線期：擴(kuò)增曲線的水平部分，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物生成量的變化。指數(shù)期：PCR指數(shù)擴(kuò)增期，擴(kuò)增曲線起峰，每個(gè)循

PCR反應(yīng)結(jié)果無擴(kuò)增條帶分析2023/09/18: PCR反應(yīng)結(jié)果無擴(kuò)增條帶分析:1、酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。2、模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。3、變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符，過高酶在前幾個(gè)循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不徹di。4、反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加Taq酶以前，將反應(yīng)體系95℃加熱5-10分鐘。5、引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇操作步驟2023/09/11: 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇操作步驟：一、凍存1、消化細(xì)胞，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。2、1000rpm離心10分鐘，棄上清液。3、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。4、將懸液分至凍存管中，每管1ml。5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。6、貼上標(biāo)簽，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。7、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃1小時(shí)）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。注意：操作時(shí)應(yīng)小心，以免液

PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)注釋2023/09/08: 循環(huán)參數(shù):1.預(yù)變性模板DNAwan全變性與PCR酶的wan全激活對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時(shí)間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時(shí)間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列wan全變性，可能的情況下可縮短該步驟時(shí)間。變性時(shí)間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹di，易造成擴(kuò)增失敗。3.引物退火退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴(kuò)增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上做出預(yù)估。退火溫度對(duì)PCR的特異性有較大影響。4.引

單克隆抗體的性質(zhì)鑒定方法2023/08/28: 當(dāng)獲得多個(gè)雜交瘤細(xì)胞株時(shí)，要了解哪一株是zui適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：（一）Ig類型測(cè)定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測(cè)定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。（二）特異性測(cè)定把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測(cè)，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。（三）抗體效價(jià)測(cè)定效價(jià)以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價(jià)也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價(jià)可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔積液效價(jià)可達(dá)1

胎牛血清質(zhì)控外觀判定要素2023/08/21: 拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來說，外觀的判斷尤為重要。1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶?

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