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上海撫生實業(yè)有限公司
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科研實驗對抗體需求指導(dǎo)2024/11/26
科研實驗工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實驗技術(shù)都需要什么樣的抗體呢？1.WBWB的蛋白經(jīng)過加熱變性之后都變成線性的結(jié)構(gòu)。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來做實驗，結(jié)果也非常特異。2.IP/CHIP我們用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因為這種抗體識別的位點可能被深深地藏在了蛋白的內(nèi)心深處。CHIP和IP沒有太大的
ELISA試驗洗滌參數(shù)與次數(shù)介紹2024/11/18
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過酶標(biāo)儀測定待測物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測物濃度。優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。1、洗滌參數(shù)主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌
干血斑DNA快速提取試劑盒實驗反應(yīng)條件優(yōu)化2024/11/04
干血斑DNA快速提取試劑盒實驗反應(yīng)條件優(yōu)化：1、變性溫度和時間：保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C,30~60s，再復(fù)雜的DNA分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。2、復(fù)性溫度和時間:PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。3、延伸溫度和時間:一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，
ELISA試劑盒樣本實驗前準(zhǔn)備2024/10/28
樣本實驗前準(zhǔn)備：ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。（1）血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（2）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（3）尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收
細(xì)胞冷凍保存方法?步驟與注意事項2024/10/21
冷凍保存方法：1、傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。2、程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。3、步驟：（1）冷凍前24-48小時
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗常見類型特點2024/10/14
ELISA實驗就是酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實現(xiàn)目標(biāo)物檢測的免疫分析方法，可測至皮摩爾（pmol）級別。ELISA常見類型：直接法：將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。特點：適用于檢測小分子抗原，優(yōu)勢：實驗步驟少，檢測速度快，無須使用二抗可避免交互反應(yīng)，
細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇過程2024/10/09
細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇原理：在不加條件下直接凍存細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時速度要快，使之迅速通過細(xì)胞易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。一、凍存
?ELISA檢測試劑盒比色解析2024/09/29
ELISA的比色測定由酶標(biāo)儀進(jìn)行，有的同行可能會認(rèn)為，既然由酶標(biāo)儀進(jìn)行，那么此時便可以萬事大吉了，其實不然，因為當(dāng)代較為先進(jìn)的酶標(biāo)儀器儀表，均有較多的功能，使用不當(dāng)，會得到令人難以理解的結(jié)果。如使用酶標(biāo)儀比色測定后，有許多陰性測定孔的吸光度值為負(fù)數(shù)或測定假陽性率大大增加等等。這主要是沒有正確地理解和使用酶標(biāo)儀所致。至于如何正確理解和使用酶標(biāo)儀詳見后面有關(guān)章節(jié)。此處，只是強調(diào)下面兩點：1、比色測定時，一定要注意酶標(biāo)儀的波長是否已調(diào)至合適或所用濾光片是否正確。由于有的臨床實驗室在進(jìn)行ELISA測定時
PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過程2024/09/24
PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過程:一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長干燥時間，以去除乙醇沉淀過程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時相對簡單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過程可能十分耗時費力。4、擴增單個產(chǎn)物時，將鎂的濃
細(xì)胞培養(yǎng)實驗基本操作2024/09/18
細(xì)胞培養(yǎng)實驗基本操作：1、進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時塑料細(xì)
PCR反應(yīng)總RNA提取操作流程2024/09/09
PCR反應(yīng)總RNA提取操作流程：1、A組織樣本：迅速將新鮮的組織切成合適的大小，在液氮中充分研磨后加裂解液裂解，或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1mlTrizol。2、B全血樣品：加入3-5倍體積的紅細(xì)胞裂解液到血樣中，室溫孵育10min，室溫3500rpm離心6min。棄上清，原每2-3ml全血樣品加1mLTrizol。3、C細(xì)胞樣品：懸浮液中生長的細(xì)胞，通過離心收集細(xì)胞后，每1×105?106細(xì)胞加入1mLTrizol，移液器吹打混勻，直接裂解或-80℃儲存一個月。貼壁
合適細(xì)胞株常見鑒定方法2024/09/02
當(dāng)獲得多個雜交瘤細(xì)胞株時，要了解哪一株是適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進(jìn)行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。3、抗體效價測定效價以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔積液效價可達(dá)100萬以上。
鑒定適合細(xì)胞株的常見方法2024/08/26
鑒定適合細(xì)胞株的常見方法：當(dāng)獲得多個雜交瘤細(xì)胞株時，要了解哪一株是適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進(jìn)行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。3、抗體效價測定效價以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）常見樣本處理2024/08/19
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。1、血漿用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。常用的抗凝劑為EDTA和ca.(C12H16NS2Na3)20等，檢測時還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。2、血清血清是于ELISA檢測的一類樣
抗體的結(jié)構(gòu)詳述2024/08/12
抗體的結(jié)構(gòu):抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者
廣泛應(yīng)用的特異性RNA酶抑制劑概述2024/08/05
下面介紹３種廣泛應(yīng)用的特異性RNA酶抑制劑。1、RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑是從人胎盤分離的一種蛋白質(zhì)可與多種RNA酶緊密結(jié)合（KI≈3x1010）形成非共價結(jié)合的等摩爾復(fù)合物，使RNA酶失活。此蛋白質(zhì)體內(nèi)可能是血管生成素的抑制劑，血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結(jié)構(gòu)與胰RNA酶類似的一種血管生成因子，幾個廠家以不同的商品名出售這種抑制劑，該蛋白質(zhì)應(yīng)置于含5mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）的50％甘油中，貯存于－20℃。抑制劑制品凍融數(shù)次后或放置在氧化條件下即應(yīng)棄之不用，因為上述處理會使蛋白質(zhì)變性從
CD44大鼠白細(xì)胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總2024/07/30
CD44大鼠白細(xì)胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總：靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行評價。簡便性：指在不影響試劑的前三項指標(biāo)的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結(jié)果
大鼠原代細(xì)胞（Primary cells）分離培養(yǎng)實驗步驟2024/07/22
原代細(xì)胞（Primarycells）是指直接從機體取出的組織或細(xì)胞獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。組織主要指組織器官、外周血及胚胎等。由于原代細(xì)胞生長緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內(nèi)）。實驗步驟：1.取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。2.在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。3.將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)
多克隆抗體和單克隆抗體的用途簡述2024/07/15
多克隆抗體和單克隆抗體的用途：1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個關(guān)鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。2、抗體的特異性是由其結(jié)合域和目標(biāo)抗原之間的相對親和力決定的，而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學(xué)研究人員和臨床醫(yī)生來說是至關(guān)重要的，因為許多應(yīng)用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來專門檢測目標(biāo)分子。結(jié)合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個重要的參數(shù)，決定了它在實驗室的實用性。3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應(yīng)用，如免疫沉淀、WestBlot和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），因為它
PCR檢測試劑盒實驗各種溫度設(shè)置2024/07/08
PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，PCR的過程可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。在PCR自動熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環(huán)，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應(yīng)從反應(yīng)混合液達(dá)到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應(yīng)管類型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加
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