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熒光定量PCR儀硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)2023/04/11: 熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處但也都有無(wú)法避免的缺憾。傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無(wú)需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測(cè)，這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部，每個(gè)樣品孔距光源和檢測(cè)器的光程各不相同——邊緣效應(yīng)，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證精確、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這類儀器在實(shí)驗(yàn)過程中通常會(huì)使用ROX(一種熒光染料)或?qū)Ｓ玫腞eferencedye作為參照校正實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為

小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞原代培養(yǎng)2023/03/20: 小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞原代培養(yǎng)：1、取約500mg脂肪組織（自外科手術(shù)患者的皮下獲?。賹⒅窘M織一次擠壓進(jìn)入準(zhǔn)備好的15m離心管中，每個(gè)離心管中的組織不超過5ml。2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中，用吸管吹打10~20次，然后靜置1min左右，用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀，不帶有血細(xì)胞為止。3、向有的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液（yi酶0.25%，I型膠原酶0.1%以1：1比例混合配制而成），將試管密封，放入37°C恒溫

淺談抗體實(shí)驗(yàn)原理2023/03/13: 抗體實(shí)驗(yàn)原理:1、特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、激活補(bǔ)體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。3、結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被

組織培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)有哪些2023/03/13: 組織培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與體內(nèi)細(xì)胞基本相同，但在大體形態(tài)以及某些細(xì)微結(jié)構(gòu)方面仍存在著一定的差異。根據(jù)細(xì)胞是否貼附于支持物上生長(zhǎng)，形態(tài)有所不同。呈懸浮生長(zhǎng)時(shí)，不論細(xì)胞原來(lái)源于體內(nèi)何種類型細(xì)胞.由于生長(zhǎng)在液體環(huán)境中，胞體基本呈圓形。大多數(shù)細(xì)胞是貼附型生長(zhǎng)的。當(dāng)細(xì)胞貼附在支持物上后，細(xì)胞分化現(xiàn)象常變得不顯著，易失去它們?cè)隗w內(nèi)時(shí)的原有特征.在形態(tài)上表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象。貼附于支持物表面后，開始仍為圓形，但為時(shí)很短，很快便經(jīng)過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1.成纖維細(xì)胞型：此細(xì)胞形態(tài)與體內(nèi)成纖維細(xì)胞的相似而得名，胞體呈

選擇合適的血清簡(jiǎn)要介紹2023/03/06: 血清是細(xì)胞培養(yǎng)中唯yi外源添加的成分不確定的物質(zhì)，血清的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當(dāng)也可能會(huì)導(dǎo)致血清質(zhì)量下降，造成細(xì)胞培養(yǎng)效果不理想。怎樣選擇合適的血清下面簡(jiǎn)要介紹：目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門，各種品牌宣稱來(lái)自各個(gè)血源地，讓人眼花繚亂。可以確定的是，除了所謂的“水貨"，它們當(dāng)中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用，或者說(shuō)適用于某一種細(xì)胞。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清來(lái)源中挑選一款，唯yi的辦法就是篩選驗(yàn)證。血清的篩選驗(yàn)證主要包括：形態(tài)驗(yàn)證、增殖能力測(cè)試和克隆形成

PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整步驟2023/02/27: 一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對(duì)于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長(zhǎng)干燥時(shí)間，以去除乙醇沉淀過程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時(shí)相對(duì)簡(jiǎn)單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過程可能十分耗時(shí)費(fèi)力。4、擴(kuò)增單個(gè)產(chǎn)物時(shí)，將鎂的濃度提升至6mM可提高反應(yīng)效率，但當(dāng)出

RT-PCR反應(yīng)注意事項(xiàng)2023/02/20: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)((ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。反應(yīng)注意事項(xiàng)：1．在實(shí)驗(yàn)過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂。2．為了防止非特異性擴(kuò)增，必須設(shè)陰性對(duì)照。3．內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動(dòng)蛋白

熒光定量檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)假陽(yáng)性解決方法2023/02/14: 一、引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。需重新設(shè)計(jì)引物。二、靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽(yáng)性。這種假陽(yáng)性可用以下方法解決：1、操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣器內(nèi)或?yàn)R出離心管外。2、除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及進(jìn)樣槍頭均應(yīng)一次性使用。3、必要時(shí)，在加標(biāo)本前，反應(yīng)管和試劑用紫

淺析各種血清功能用途2023/02/10: 1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等，去除作用對(duì)分子量大小并無(wú)區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)

小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒挑選要求2023/01/29: 小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒挑選要求：ELISA試劑盒深受廣大科研工作者的喜歡,并且市面上的ELISA試劑盒數(shù)不勝數(shù)，這讓科研朋友們挑選的時(shí)分都比較糾結(jié)。到底怎樣挑選試劑盒呢，選什么樣的試劑盒才是性價(jià)比高呢？現(xiàn)將帶您了解挑選對(duì)的ELISA試劑盒6個(gè)挑選要求，希望能幫助更多的科研朋友！1、查找待測(cè)樣本的蛋白濃度：能夠通過美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（NCBI）的文獻(xiàn)，UniversalProtein（uniprot）上給出的蛋白表達(dá)量參閱值來(lái)比較elisa試劑盒中給出的樣本值與報(bào)導(dǎo)值是否一致；2、試劑盒的

豚鼠ELISA試劑盒安全性說(shuō)明2023/01/16: 豚鼠ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物su標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。豚鼠ELISA試劑盒安全性說(shuō)明:1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2、實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3、不要用嘴吸取試

小鼠ELISA試劑盒血清解凍操作技巧2023/01/09: 小鼠ELISA試劑盒血清解凍操作技巧：1、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。2、按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。4、隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。5、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻，溫

ELISA實(shí)驗(yàn)正確的洗板技術(shù)2023/01/05: 正確的洗滌和沖洗方案尤其重要。在下游分析過程中，不充分、不一致和/或過度清洗會(huì)造成問題。有許多洗板的方法，包括使用自動(dòng)洗板機(jī)、手動(dòng)分流器或洗瓶。當(dāng)手動(dòng)吸出孔中的液體時(shí)，要注意不要碰到孔的底部--吸管的尖duan應(yīng)該放在孔的一側(cè)。為了減少背景信號(hào)，清洗量需要足夠大，以去除孔中未結(jié)合的樣品和試劑。然而，過度洗滌會(huì)減少目標(biāo)信號(hào)。確保所有的孔都被平均清洗，以避免在整個(gè)檢測(cè)板上引入信號(hào)變化。要做到這一點(diǎn)，如果是手工清洗，請(qǐng)檢查移液器吸頭是否固定好，如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，所有分配和吸液的噴頭必須沒有堵塞。你可

大鼠ELISA試劑盒應(yīng)用范圍2022/12/19: ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大

?PCR反應(yīng)體系的組成與反應(yīng)條件的優(yōu)化2022/11/23: PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個(gè)組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。1．反應(yīng)緩沖液：一般隨TaqDNA聚合酶供應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液含：50mMKCl，10mMTris-HCl（pH8.3室溫），1.5mMMgCl2。Mg2+的濃度對(duì)反應(yīng)的特異性及產(chǎn)量有著顯著影響。濃度過高，使反應(yīng)特異性降低；濃度過低，使產(chǎn)物減少。在各種單核苷酸濃度為

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系傳代培養(yǎng)2022/11/14: 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。具體操作步驟：1、將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。2、加入0.5—1ml0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

二抗特異性可考慮方面2022/11/07: 二抗特異性是指一抗或免疫球蛋白被二抗識(shí)別的區(qū)域或鏈?？赡苄枰獙?shí)際運(yùn)用的時(shí)候在考慮以下方面：1、抗IgG(H+L):一種具有(H+L)標(biāo)記的二抗，靶向IgG分子的重鏈和輕鏈(即Fc和Fab區(qū)域)。這些抗體也會(huì)與其他類(如IgE、IgD等)發(fā)生反應(yīng)，因?yàn)檫@些類之間共享輕鏈。更廣泛的表位識(shí)別(H+L)二抗使其適用于大多數(shù)需要二抗的免疫分析。2、抗iggFc片段或重鏈:與(H+L)二抗不同，以靶免疫球蛋白Fc區(qū)域或重鏈為靶點(diǎn)的二抗具有類特異性，不會(huì)與其他類免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)。針對(duì)Fc片段的二抗被吸附在F

生物菌種幾種常用保藏方法2022/10/31: 生物菌種幾種常用保藏方法：1.傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2.液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。4.寄主保藏法用于目前尚不能

PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽(yáng)性問題解疑2022/10/24: PCR反應(yīng)時(shí)有時(shí)出現(xiàn)假陽(yáng)性，表現(xiàn)出出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時(shí)其條帶更整齊，亮度更高。1、引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。需重新設(shè)計(jì)引物。2、靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽(yáng)性。這種假陽(yáng)性可用以下方法解決：操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器

PCR反應(yīng)條件的控制2022/10/17: PCR反應(yīng)條件的控制：1.PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應(yīng)溫度（1）變性溫度和時(shí)間95℃，30s。（2）退火溫度和時(shí)間低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。（3）延伸溫度和時(shí)間72℃，1min/kb(10kb內(nèi)）。（4）Tm值=4(G+C)+2(A+

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