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PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整步驟2023/02/27
一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長干燥時間，以去除乙醇沉淀過程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時相對簡單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過程可能十分耗時費力。4、擴增單個產(chǎn)物時，將鎂的濃度提升至6mM可提高反應(yīng)效率，但當(dāng)出
RT-PCR反應(yīng)注意事項2023/02/20
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)((ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。反應(yīng)注意事項：1．在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂。2．為了防止非特異性擴增，必須設(shè)陰性對照。3．內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白
熒光定量檢測試劑盒試驗假陽性解決方法2023/02/14
一、引物設(shè)計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計引物。二、靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：1、操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣器內(nèi)或濺出離心管外。2、除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭均應(yīng)一次性使用。3、必要時，在加標(biāo)本前，反應(yīng)管和試劑用紫
淺析各種血清功能用途2023/02/10
1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進行研究的實驗中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細(xì)胞因子、生長因子等，去除作用對分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)
小鼠ELISA檢測試劑盒挑選要求2023/01/29
小鼠ELISA檢測試劑盒挑選要求：ELISA試劑盒深受廣大科研工作者的喜歡,并且市面上的ELISA試劑盒數(shù)不勝數(shù)，這讓科研朋友們挑選的時分都比較糾結(jié)。到底怎樣挑選試劑盒呢，選什么樣的試劑盒才是性價比高呢？現(xiàn)將帶您了解挑選對的ELISA試劑盒6個挑選要求，希望能幫助更多的科研朋友！1、查找待測樣本的蛋白濃度：能夠通過美國國立生物技術(shù)信息中心（NCBI）的文獻(xiàn)，UniversalProtein（uniprot）上給出的蛋白表達(dá)量參閱值來比較elisa試劑盒中給出的樣本值與報導(dǎo)值是否一致；2、試劑盒的
豚鼠ELISA試劑盒安全性說明2023/01/16
豚鼠ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）。已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物su標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。豚鼠ELISA試劑盒安全性說明:1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2、實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3、不要用嘴吸取試
小鼠ELISA試劑盒血清解凍操作技巧2023/01/09
小鼠ELISA試劑盒血清解凍操作技巧：1、請勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。2、按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4、隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻，溫
ELISA實驗正確的洗板技術(shù)2023/01/05
正確的洗滌和沖洗方案尤其重要。在下游分析過程中，不充分、不一致和/或過度清洗會造成問題。有許多洗板的方法，包括使用自動洗板機、手動分流器或洗瓶。當(dāng)手動吸出孔中的液體時，要注意不要碰到孔的底部--吸管的尖duan應(yīng)該放在孔的一側(cè)。為了減少背景信號，清洗量需要足夠大，以去除孔中未結(jié)合的樣品和試劑。然而，過度洗滌會減少目標(biāo)信號。確保所有的孔都被平均清洗，以避免在整個檢測板上引入信號變化。要做到這一點，如果是手工清洗，請檢查移液器吸頭是否固定好，如果使用自動洗板機，所有分配和吸液的噴頭必須沒有堵塞。你可
大鼠ELISA試劑盒應(yīng)用范圍2022/12/19
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大
?PCR反應(yīng)體系的組成與反應(yīng)條件的優(yōu)化2022/11/23
PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。1．反應(yīng)緩沖液：一般隨TaqDNA聚合酶供應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液含：50mMKCl，10mMTris-HCl（pH8.3室溫），1.5mMMgCl2。Mg2+的濃度對反應(yīng)的特異性及產(chǎn)量有著顯著影響。濃度過高，使反應(yīng)特異性降低；濃度過低，使產(chǎn)物減少。在各種單核苷酸濃度為
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系傳代培養(yǎng)2022/11/14
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。具體操作步驟：1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。2、加入0.5—1ml0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
二抗特異性可考慮方面2022/11/07
二抗特異性是指一抗或免疫球蛋白被二抗識別的區(qū)域或鏈。可能需要實際運用的時候在考慮以下方面：1、抗IgG(H+L):一種具有(H+L)標(biāo)記的二抗，靶向IgG分子的重鏈和輕鏈(即Fc和Fab區(qū)域)。這些抗體也會與其他類(如IgE、IgD等)發(fā)生反應(yīng)，因為這些類之間共享輕鏈。更廣泛的表位識別(H+L)二抗使其適用于大多數(shù)需要二抗的免疫分析。2、抗iggFc片段或重鏈:與(H+L)二抗不同，以靶免疫球蛋白Fc區(qū)域或重鏈為靶點的二抗具有類特異性，不會與其他類免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)。針對Fc片段的二抗被吸附在F
生物菌種幾種常用保藏方法2022/10/31
生物菌種幾種常用保藏方法：1.傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2.液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。4.寄主保藏法用于目前尚不能
PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽性問題解疑2022/10/24
PCR反應(yīng)時有時出現(xiàn)假陽性，表現(xiàn)出出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。1、引物設(shè)計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計引物。2、靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器
PCR反應(yīng)條件的控制2022/10/17
PCR反應(yīng)條件的控制：1.PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應(yīng)溫度（1）變性溫度和時間95℃，30s。（2）退火溫度和時間低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。（3）延伸溫度和時間72℃，1min/kb(10kb內(nèi)）。（4）Tm值=4(G+C)+2(A+
周期素G抗體的制備過程2022/10/10
周期素G抗體的制備過程：1.免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。4.免
寄生曲霉特性與分布2022/10/05
寄生曲霉(AspergillusparasiticusSpeare)真子囊菌亞綱，曲霉目，曲霉科，曲霉屬。黃曲霉AspergillusflavusLinkexFr．和寄生曲霉AspergillusparasiticusSpeare是已知能在玉米中產(chǎn)生黃曲霉毒素的僅有的兩種真菌。在玉米上，黃曲霉較寄生曲霉占優(yōu)勢。受害籽粒上可見黃綠色的霉層。貯藏中的籽粒，其受害常常從籽粒下部開始，田間的果穗，其受害常從果穗頂部開始。這兩種曲霉分生孢子梗直立，頂部為一膨大的泡囊，泡囊上著生一行瓶狀小梗，每個小梗上著生
禽腺病毒PCR試劑盒使用方法2022/09/26
使用方法:一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。1.標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。2.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。3.在7號管中加入5μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。4.換槍頭，在6號管中加入5μL1×10
探討區(qū)分胎牛血清的優(yōu)劣方法2022/09/19
現(xiàn)在市場上的胎牛血清種類，即使是做過很多實驗的小伙伴也難免會踩到坑，很難去分清血清的優(yōu)劣好壞。那么到底怎么才能區(qū)分胎牛血清的優(yōu)劣呢？在這里給大家總結(jié)了以下幾點：1、看顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國產(chǎn)血
細(xì)菌接種與分離方法2022/09/13
大多數(shù)細(xì)菌均可以通過人工方法培養(yǎng)，只有將微生物培養(yǎng)出來才能對它進行研究、鑒定和應(yīng)用。根據(jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。1．平板劃線分離培養(yǎng)法對混有多種細(xì)菌，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細(xì)菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：①分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的細(xì)菌的分離。先用接種環(huán)挑取標(biāo)本涂布于瓊脂平板1區(qū)（占培養(yǎng)基總面積的?）并作數(shù)條劃線，再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個區(qū)域，均將接種環(huán)燒灼
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