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免疫共沉淀的優(yōu)缺點(diǎn)2021/12/21: 免疫共沉淀的優(yōu)點(diǎn)1.相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)。2.蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響。3.可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。免疫共沉淀的缺點(diǎn)1.可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；2.兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；3.必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇最后檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。

論述熒光原位雜交優(yōu)點(diǎn)主要體現(xiàn)2021/12/15: 熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)原理是將熒光素直接或間接標(biāo)記的核酸探針[或生物素、dinitrophenyl（I）NP）aminoacetylAAFfluorine（AAF）等標(biāo)記的核酸探針與待測(cè)樣本中的核酸序列按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則進(jìn)行雜交，經(jīng)洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)，原理是利用報(bào)告分子（生物素）標(biāo)記核酸探針，然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交，若兩者同源互補(bǔ)，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時(shí)可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親

血清主要包括類(lèi)目2021/12/09: 胎牛血清主要成分：血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其主要由水和各種化學(xué)成分組成,包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白、甘油三酯、總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，從而達(dá)到生命機(jī)體的生理平衡。血清類(lèi)目齊全，主要包括：①動(dòng)物血清系列：如馬血清、山羊血清、綿羊血清、兔血清、雞血清、豬血清、大牛血清、小牛血清、胎牛血清、狗血清、驢血清、大鼠血清、小鼠血清等等；②血漿系列：胎牛血漿

夾心ELISA封閉和加樣過(guò)程2021/11/29: 夾心ELISA測(cè)定兩層抗體（捕獲抗體和檢測(cè)抗體）之間的抗原。目標(biāo)抗原必須包含至少兩個(gè)能夠結(jié)合到抗體的抗原表位。單克隆或多克隆抗體均可在夾心ELISA系統(tǒng)中用作捕獲抗體和檢測(cè)抗體。單克隆抗體識(shí)別單一表位，可對(duì)抗原中微小差別進(jìn)行定量檢測(cè)。多克隆抗體通常用作捕獲抗體以沉降盡可能多的抗原。夾心ELISA省去了分析之前的樣品純化步驟，而且提高了分析靈敏度（靈敏度比直接或間接ELISA高2-5倍）。封閉和加樣過(guò)程：1.每孔添加200μL封閉緩沖液（5%脫脂奶粉/PBS），封閉包被孔中剩余的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)。2

介紹判斷Hyclone胎牛血清質(zhì)量方法2021/11/24: HyClone胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。如何儲(chǔ)存和解凍Hyclone胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在

ELISA實(shí)驗(yàn)原理及常用方法2021/11/17: 實(shí)驗(yàn)原理：1.包被：抗原/抗體，固相化2.反響：1)待測(cè)抗體/抗原；2)酶標(biāo)抗原/抗體3.洗滌：使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的別離4.底物顯色：定性/定量剖析常用方法：1.間接法檢測(cè)抗體常用的辦法,首要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)。優(yōu)勢(shì)：二抗能夠加強(qiáng)信號(hào)，并且有多種挑選能做不同的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保留它多的免疫反響性。缺陷：交互反響發(fā)生的機(jī)率較高2.雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原常用的辦法。優(yōu)勢(shì)：高活絡(luò)、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事前純化。缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。3.

?酶免疫組化的關(guān)鍵操作步驟2021/11/08: 1、標(biāo)本固定：固定的目的是①防止標(biāo)本從玻片上脫落；②除去防礙抗原-抗體結(jié)合的類(lèi)脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③固定的標(biāo)本易于保存。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對(duì)組織要*浸蠟、切片時(shí)刀片要干凈和鋒利。否則，容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60度20min,然后立即二甲苯1-3分別10min,但當(dāng)天制好的切片可以60度3-4h.水化用梯度乙醇（由高到低）。若脫蠟和水化不全易出現(xiàn)局灶性反

生化試劑主要性能與使用時(shí)注意事項(xiàng)2021/11/03: 生化試劑主要性能指標(biāo)：1.穩(wěn)定性：指在規(guī)定條件下經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的保存，仍能達(dá)到相應(yīng)的性能指標(biāo)，如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。2.反應(yīng)靈敏度：指單位濃度(或活性)的測(cè)定物反應(yīng)所產(chǎn)生的反應(yīng)度，反應(yīng)度越高，靈敏度越大。3.精密度：結(jié)果間相互符合的*程度。4.準(zhǔn)確度：與參考測(cè)定程序結(jié)果的*性。5.線性范圍：在規(guī)定的重復(fù)性和線性偏差下，測(cè)得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。6.基質(zhì)效應(yīng)：基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分?；|(zhì)常常對(duì)分析物的分析過(guò)程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的

抗體的保存需要注意要點(diǎn)2021/10/26: 抗體純化后，一般將其緩沖液置換成PBS，便于后期標(biāo)記或其他用途使用，如果濃度太低，需要濃縮,抗體濃縮后濃度最好不要太高，太高容易引起沉淀。透析濃縮方法：1.透析袋濃縮將純化的抗體裝入透析袋中，透析袋表面覆滿PEG20,000進(jìn)行濃縮（不要用蔗糖濃縮）。2.超濾管濃縮將純化的抗體轉(zhuǎn)入15ml的超濾管，3,500rpm離心12min左右（根據(jù)要濃縮的體積摸索離心時(shí)間）。3.抗體濃度測(cè)定取適量抗體檢測(cè)OD280nm的吸光度，讀數(shù)不要超過(guò)2。如果讀數(shù)超過(guò)2，再稀釋?zhuān)梦舛茸x數(shù)除以1.35，再乘以稀釋倍

普通抗體的五個(gè)種類(lèi)2021/10/20: 按照不同的分類(lèi)方式，抗體可以分成許多類(lèi)型，目前常用的分類(lèi)方式將普通抗體按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分為IgG、IgM、IgA、IgE、IgD五類(lèi)。--IgG是血清中一種主要的Ig，含量占總Ig的65—75%左右。廣泛分布于組織液中，血管內(nèi)、外間隙中分布量大體相當(dāng)。是機(jī)體抗感染的一種重要物質(zhì)。--IgM是成熟胎兒合成的第一類(lèi)Ig，也是在感染或免疫后最早產(chǎn)生的Ig，5類(lèi)Ig中IgM*，故其細(xì)胞毒活性和細(xì)胞溶解活性也*。天然的血型抗體是IgM，有些自身抗體如抗磷脂抗體、RF等也屬于IgM。胎兒臍血中IgM抗

ELISA試劑盒有高特異性?xún)?yōu)勢(shì)三個(gè)具體表現(xiàn)2021/10/12: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)因多重優(yōu)勢(shì)在免疫學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用，急速發(fā)展。那么它所擁有的高特異性?xún)?yōu)勢(shì)有哪些呢？1.特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無(wú)假陽(yáng)性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性。2.穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測(cè)定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開(kāi)始下降為止，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。3.簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在

DNA復(fù)制酶系作用順序2021/10/08: 1.拓?fù)洚悩?gòu)酶使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)，形成其基本的雙螺旋結(jié)構(gòu)。2.解鏈酶使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)，堿基間氫鍵斷裂，形成兩條單鏈DNA，構(gòu)成”復(fù)制叉“。3.單鏈DNA結(jié)合蛋白單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合在兩條單鏈DNA上，穩(wěn)定單鏈DNA，阻止DNA復(fù)性，避免被核酸酶降解，便于復(fù)制子代DNA。4.引物酶是一種依賴(lài)DNA的RNA聚合酶，該酶以DNA為模板，聚合一段RNA短鏈引物，以提供自由的3'-OH，形成引發(fā)體，使子代DNA鏈能夠開(kāi)始聚合。5.DNA聚合酶由于DNA聚合酶只能以5'→3'方向聚合子代DNA鏈

解析了解細(xì)胞培養(yǎng)基2021/09/27: 常見(jiàn)問(wèn)題解答：Q：針對(duì)不同細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基配方一樣嗎?如何獲知呢?A：不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。一般ATCC購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞，針對(duì)不同細(xì)胞株，會(huì)有詳細(xì)介紹，包括生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類(lèi)型等。如人源乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞一般為1640，人源肺癌細(xì)胞A549可用DMEM培養(yǎng)基。Q：培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?A：因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來(lái)顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會(huì)由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)后，變黃后就暗示我們

化學(xué)試劑的貯存及貯存環(huán)境管理2021/09/24: 化學(xué)試劑對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的作用及為重要，只是因?yàn)樗奶厥庑?，?duì)于它的管理也是實(shí)驗(yàn)室管理工作的重中之重。那么該怎么管理才能做好化學(xué)試劑的管理呢？下面關(guān)于化學(xué)試劑（包括特殊的化學(xué)試劑）的貯存及貯存環(huán)境。一、化學(xué)試劑的貯存環(huán)境1、一般的化學(xué)試劑室應(yīng)保持陰涼、避光，以防止因?yàn)殛?yáng)光照射及室溫偏高而造成的試劑變質(zhì)、失效等問(wèn)題。2、化學(xué)試劑室內(nèi)應(yīng)嚴(yán)禁明火，并且要準(zhǔn)備好消防滅火設(shè)施器材。3、化學(xué)試劑貯藏室室溫應(yīng)保持以5-25攝氏度。4、化學(xué)性質(zhì)或防護(hù)、滅火方法等會(huì)相互抵觸的化學(xué)危險(xiǎn)品，不得在同一柜內(nèi)存放。5、危險(xiǎn)品的

ELISA 測(cè)定法中用到的常規(guī)樣本制備指南2021/09/07: 該指南適用于制備ELISA測(cè)定法中用到的常規(guī)樣本，而*的樣品制備程序可根據(jù)需測(cè)定靶標(biāo)及測(cè)定方法法作相應(yīng)調(diào)整。選用新測(cè)定方法時(shí)，建議查閱相關(guān)文獻(xiàn)選擇與您樣本相似的實(shí)驗(yàn)步驟作為參考。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液將培養(yǎng)基移至離心管，4℃，1,500rpm離心10分鐘。立即進(jìn)行上清液的分裝（血清）并在-80℃下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)細(xì)胞提取物將組織培養(yǎng)板放置在冰上吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS輕輕洗滌細(xì)胞一次吸出PBS，加入100mm培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液收集細(xì)胞至在傾斜板中，然后移至經(jīng)過(guò)預(yù)冷的離心管

轉(zhuǎn)錄中介因子1-βELISA試劑盒標(biāo)本要求2021/09/02: 一、標(biāo)本要求1.血清：溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2.血漿：根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或其他作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。3.尿液：無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分

細(xì)胞樣品的保存操作步驟2021/08/24: 一、操作步驟：1、在37℃5%CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上，用培育基培育，時(shí)間通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定；2、細(xì)胞長(zhǎng)好后，用洗刷液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷；3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細(xì)胞，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理；順次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二甲苯洗刷，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進(jìn)行再水化，每次5min，后浸泡于洗刷液中；5、在37℃用胃蛋

介紹三種細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)條件2021/08/18: 細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)條件：一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng):在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，最困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。常見(jiàn)的是小牛血清。血清提供生長(zhǎng)必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會(huì)了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時(shí)血清才可被取代。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，高速冷凍離心機(jī)塑料等作為支持物。⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需

小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒反應(yīng)五要素2021/08/04: 需要自備的器材：1．方法儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光PCR擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。2．耗材：熒光PCR專(zhuān)用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌離心管、吸頭（10µL、200µL、1000µL）、滅菌雙蒸水。反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知

免疫熒光試劑盒操作步驟2021/07/28: 免疫熒光染色試劑盒(ImmunolFluorenceStainingKit)系列是Elabscience®開(kāi)發(fā)的用于細(xì)胞或組織切片檢測(cè)免疫熒光染色的試劑盒。在有適當(dāng)?shù)囊豢箼z測(cè)特定的目標(biāo)蛋白時(shí)，就可以使用免疫熒光染色試劑盒檢測(cè)到紅色、綠色或藍(lán)色等熒光。推薦Elabscience®的免疫熒光染色的試劑盒。操作步驟：1.免疫熒光染色的準(zhǔn)備工作A.固定液的準(zhǔn)備：推薦使用4%多聚甲醛作為固定液(E-IR-R113)，或根據(jù)特定的一抗或樣品采用有效成分為乙醇、甲醇或其它類(lèi)型的固定液。B.TBST工作液的準(zhǔn)備

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