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ELISA實(shí)驗(yàn)原理及常用方法2021/11/17: 實(shí)驗(yàn)原理：1.包被：抗原/抗體，固相化2.反響：1)待測抗體/抗原；2)酶標(biāo)抗原/抗體3.洗滌：使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的別離4.底物顯色：定性/定量剖析常用方法：1.間接法檢測抗體常用的辦法,首要用于對病原體抗體的檢測。優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保留它多的免疫反響性。缺陷：交互反響發(fā)生的機(jī)率較高2.雙抗體夾心法檢測大分子抗原常用的辦法。優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。3.

?酶免疫組化的關(guān)鍵操作步驟2021/11/08: 1、標(biāo)本固定：固定的目的是①防止標(biāo)本從玻片上脫落；②除去防礙抗原-抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③固定的標(biāo)本易于保存。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對組織要*浸蠟、切片時(shí)刀片要干凈和鋒利。否則，容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60度20min,然后立即二甲苯1-3分別10min,但當(dāng)天制好的切片可以60度3-4h.水化用梯度乙醇（由高到低）。若脫蠟和水化不全易出現(xiàn)局灶性反

生化試劑主要性能與使用時(shí)注意事項(xiàng)2021/11/03: 生化試劑主要性能指標(biāo)：1.穩(wěn)定性：指在規(guī)定條件下經(jīng)過一段時(shí)間的保存，仍能達(dá)到相應(yīng)的性能指標(biāo)，如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。2.反應(yīng)靈敏度：指單位濃度(或活性)的測定物反應(yīng)所產(chǎn)生的反應(yīng)度，反應(yīng)度越高，靈敏度越大。3.精密度：結(jié)果間相互符合的*程度。4.準(zhǔn)確度：與參考測定程序結(jié)果的*性。5.線性范圍：在規(guī)定的重復(fù)性和線性偏差下，測得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。6.基質(zhì)效應(yīng)：基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分?；|(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的

抗體的保存需要注意要點(diǎn)2021/10/26: 抗體純化后，一般將其緩沖液置換成PBS，便于后期標(biāo)記或其他用途使用，如果濃度太低，需要濃縮,抗體濃縮后濃度最好不要太高，太高容易引起沉淀。透析濃縮方法：1.透析袋濃縮將純化的抗體裝入透析袋中，透析袋表面覆滿PEG20,000進(jìn)行濃縮（不要用蔗糖濃縮）。2.超濾管濃縮將純化的抗體轉(zhuǎn)入15ml的超濾管，3,500rpm離心12min左右（根據(jù)要濃縮的體積摸索離心時(shí)間）。3.抗體濃度測定取適量抗體檢測OD280nm的吸光度，讀數(shù)不要超過2。如果讀數(shù)超過2，再稀釋，用吸光度讀數(shù)除以1.35，再乘以稀釋倍

普通抗體的五個(gè)種類2021/10/20: 按照不同的分類方式，抗體可以分成許多類型，目前常用的分類方式將普通抗體按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分為IgG、IgM、IgA、IgE、IgD五類。--IgG是血清中一種主要的Ig，含量占總Ig的65—75%左右。廣泛分布于組織液中，血管內(nèi)、外間隙中分布量大體相當(dāng)。是機(jī)體抗感染的一種重要物質(zhì)。--IgM是成熟胎兒合成的第一類Ig，也是在感染或免疫后最早產(chǎn)生的Ig，5類Ig中IgM*，故其細(xì)胞毒活性和細(xì)胞溶解活性也*。天然的血型抗體是IgM，有些自身抗體如抗磷脂抗體、RF等也屬于IgM。胎兒臍血中IgM抗

ELISA試劑盒有高特異性優(yōu)勢三個(gè)具體表現(xiàn)2021/10/12: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)因多重優(yōu)勢在免疫學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用，急速發(fā)展。那么它所擁有的高特異性優(yōu)勢有哪些呢？1.特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性。2.穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。3.簡便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好，在

DNA復(fù)制酶系作用順序2021/10/08: 1.拓?fù)洚悩?gòu)酶使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)解開，形成其基本的雙螺旋結(jié)構(gòu)。2.解鏈酶使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，堿基間氫鍵斷裂，形成兩條單鏈DNA，構(gòu)成”復(fù)制叉“。3.單鏈DNA結(jié)合蛋白單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合在兩條單鏈DNA上，穩(wěn)定單鏈DNA，阻止DNA復(fù)性，避免被核酸酶降解，便于復(fù)制子代DNA。4.引物酶是一種依賴DNA的RNA聚合酶，該酶以DNA為模板，聚合一段RNA短鏈引物，以提供自由的3'-OH，形成引發(fā)體，使子代DNA鏈能夠開始聚合。5.DNA聚合酶由于DNA聚合酶只能以5'→3'方向聚合子代DNA鏈

解析了解細(xì)胞培養(yǎng)基2021/09/27: 常見問題解答：Q：針對不同細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基配方一樣嗎?如何獲知呢?A：不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。一般ATCC購買的細(xì)胞，針對不同細(xì)胞株，會有詳細(xì)介紹，包括生長的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。如人源乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞一般為1640，人源肺癌細(xì)胞A549可用DMEM培養(yǎng)基。Q：培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?A：因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來說，細(xì)胞吸收營養(yǎng)后，變黃后就暗示我們

化學(xué)試劑的貯存及貯存環(huán)境管理2021/09/24: 化學(xué)試劑對于實(shí)驗(yàn)室的作用及為重要，只是因?yàn)樗奶厥庑裕瑢τ谒墓芾硪彩菍?shí)驗(yàn)室管理工作的重中之重。那么該怎么管理才能做好化學(xué)試劑的管理呢？下面關(guān)于化學(xué)試劑（包括特殊的化學(xué)試劑）的貯存及貯存環(huán)境。一、化學(xué)試劑的貯存環(huán)境1、一般的化學(xué)試劑室應(yīng)保持陰涼、避光，以防止因?yàn)殛柟庹丈浼笆覝仄叨斐傻脑噭┳冑|(zhì)、失效等問題。2、化學(xué)試劑室內(nèi)應(yīng)嚴(yán)禁明火，并且要準(zhǔn)備好消防滅火設(shè)施器材。3、化學(xué)試劑貯藏室室溫應(yīng)保持以5-25攝氏度。4、化學(xué)性質(zhì)或防護(hù)、滅火方法等會相互抵觸的化學(xué)危險(xiǎn)品，不得在同一柜內(nèi)存放。5、危險(xiǎn)品的

ELISA 測定法中用到的常規(guī)樣本制備指南2021/09/07: 該指南適用于制備ELISA測定法中用到的常規(guī)樣本，而*的樣品制備程序可根據(jù)需測定靶標(biāo)及測定方法法作相應(yīng)調(diào)整。選用新測定方法時(shí)，建議查閱相關(guān)文獻(xiàn)選擇與您樣本相似的實(shí)驗(yàn)步驟作為參考。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液將培養(yǎng)基移至離心管，4℃，1,500rpm離心10分鐘。立即進(jìn)行上清液的分裝（血清）并在-80℃下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)細(xì)胞提取物將組織培養(yǎng)板放置在冰上吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS輕輕洗滌細(xì)胞一次吸出PBS，加入100mm培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液收集細(xì)胞至在傾斜板中，然后移至經(jīng)過預(yù)冷的離心管

轉(zhuǎn)錄中介因子1-βELISA試劑盒標(biāo)本要求2021/09/02: 一、標(biāo)本要求1.血清：溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2.血漿：根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或其他作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。3.尿液：無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分

細(xì)胞樣品的保存操作步驟2021/08/24: 一、操作步驟：1、在37℃5%CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上，用培育基培育，時(shí)間通過預(yù)試驗(yàn)確定；2、細(xì)胞長好后，用洗刷液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷；3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細(xì)胞，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理；順次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二甲苯洗刷，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進(jìn)行再水化，每次5min，后浸泡于洗刷液中；5、在37℃用胃蛋

介紹三種細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)條件2021/08/18: 細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)條件：一、動物細(xì)胞培養(yǎng):在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，最困難的是動物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。常見的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時(shí)血清才可被取代。在這里，血清等于是動物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動物細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，高速冷凍離心機(jī)塑料等作為支持物。⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需

小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒反應(yīng)五要素2021/08/04: 需要自備的器材：1．方法儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光PCR擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。2．耗材：熒光PCR專用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌離心管、吸頭（10µL、200µL、1000µL）、滅菌雙蒸水。反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知

免疫熒光試劑盒操作步驟2021/07/28: 免疫熒光染色試劑盒(ImmunolFluorenceStainingKit)系列是Elabscience®開發(fā)的用于細(xì)胞或組織切片檢測免疫熒光染色的試劑盒。在有適當(dāng)?shù)囊豢箼z測特定的目標(biāo)蛋白時(shí)，就可以使用免疫熒光染色試劑盒檢測到紅色、綠色或藍(lán)色等熒光。推薦Elabscience®的免疫熒光染色的試劑盒。操作步驟：1.免疫熒光染色的準(zhǔn)備工作A.固定液的準(zhǔn)備：推薦使用4%多聚甲醛作為固定液(E-IR-R113)，或根據(jù)特定的一抗或樣品采用有效成分為乙醇、甲醇或其它類型的固定液。B.TBST工作液的準(zhǔn)備

細(xì)胞傳代培育過程中的原則與注意事項(xiàng)2021/07/21: 在生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)中常常會用到細(xì)胞系，指原代細(xì)胞培育物經(jīng)傳代成功后所繁衍的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培育細(xì)胞。細(xì)胞系是經(jīng)過細(xì)胞傳代或續(xù)代培育是將細(xì)胞從現(xiàn)有的培育物分隔或分出來開端新的培育，并參加新鮮培育液來促進(jìn)擴(kuò)增的常用手法。可是細(xì)胞系與新分離的或原代細(xì)胞的培育條件相類似，但也有一些根本不同的：（1）每個(gè)細(xì)胞系需求其特定的成長因子混合物（2）與原代細(xì)胞比較，它們的成長需求更嚴(yán)密的監(jiān)測，由于使它們無限成長的突變同時(shí)也會形成它們很快到達(dá)過度成長。因而，當(dāng)細(xì)胞系成長到了簡直覆蓋整個(gè)培育器皿底部，也便是

elisa檢測試劑盒正確使用要點(diǎn)2021/07/16: 雖然elisa檢測試劑盒看起來比較簡單，但實(shí)驗(yàn)過程操作點(diǎn)的許多需要掌握操作步驟。如果稍有不慎，操作不合理的地方，會造成很多問題，ELISA試劑盒影響了檢測的精度，大大降低了測試質(zhì)量。如花板，假陽性，全彩色，全彩色，顏色空間的低。下面介紹elisa檢測試劑盒正確使用要點(diǎn)：1.血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3.細(xì)胞上清液：1

蛋白酶K（Proteinase K）知識課堂2021/07/07: 蛋白酶K在BSE的檢測中用來消化PrPc,用來區(qū)別致病的PrPsc,它的正確使用對檢測特異性和敏感性都有重要影響。概述:蛋白酶K是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活,該酶在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性來源:源于白色念球菌(Tritirachiumalbum)反應(yīng)條件:蛋白酶K在較廣的緩沖液pH范圍(pH4-12.5),溫度范圍(37-60℃),鹽濃度(如:3MGuHCl)或尿素(4M)條件下均有活性

菌種常用的孢子分離的三種方法2021/06/30: 為了獲得某種真菌類藥材的純菌種，必須從其它微生物中分離出來，稱為菌種的分離。常用的孢子分離又可分為以下幾種方法:1.褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開傘、未破裂的子實(shí)體，洗凈后用0.1%sheng汞或75%酒精表面滅菌2分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)福爾馬林熏蒸消毒12~24小時(shí)，再按無菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，最后置于25~28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。2.孢子印采集法:取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子

檢測實(shí)驗(yàn)中七種常見微生物2021/06/23: 在產(chǎn)品微生物檢測過程中，實(shí)驗(yàn)員們會接觸到許多不同的微生物種類，小編就來總結(jié)下檢測實(shí)驗(yàn)中常檢出的微生物。1.大腸菌群大腸菌群，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌。大腸菌群都是直接或間接地來自人和溫血?jiǎng)游锏募S便。一般食品中大腸菌群超標(biāo)，表示食品受動溫血?jiǎng)游锏募S便污染，其中典型大腸桿菌為糞便近期污染，其他菌屬則可能為糞便的陳舊污染。人吃了大腸菌群超標(biāo)的食物可能會導(dǎo)致：腸道傳染病、食物中毒等。2.霉菌霉菌，是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，它們往往能形成分枝繁

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