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PCR檢測試劑盒實驗各種溫度設(shè)置2024/07/08

PCR又稱聚合酶鏈式反應(yīng)，PCR的過程可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。在PCR自動熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環(huán)，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應(yīng)從反應(yīng)混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應(yīng)管類型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加

實驗室生化試劑盒選購參照要素2024/07/01

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑等。其次，在實驗室，可參照要素選購生化試劑盒。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度(A1)和約5分鐘后的吸光度(A2)

大鼠elisa試劑盒?雙抗體夾心法操作方法2024/06/24

大鼠elisa試劑盒雙抗體夾心法操作方法：1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時

ELISA試驗移液技術(shù)注意點2024/06/24

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是一種基于多孔板的技術(shù)，用于確定生物樣品中的抗體、抗原或其他蛋白質(zhì)的濃度，使用發(fā)色、熒光或發(fā)光的讀數(shù)。ELISA實驗試劑和樣品處理不當(dāng)或儲存不正確會影響下游分析，因為不同的緩沖劑和試劑會有不同的儲存要求。例如，有些必須儲存在冰箱里，有些在室溫下，有些用感光罩（如鋁箔）。如果有計劃在未來的實驗中使用相同的樣品，那么應(yīng)該把它們放入等分試樣中，需要時再取出來。這將避免多次冷凍/解凍循環(huán)，保持準確的結(jié)果。當(dāng)樣品準備使用時，應(yīng)在冰上解凍（或根據(jù)方案）。移液技術(shù)注意要點如下：1

PCR反應(yīng)條件分析2024/06/18

PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。PCR反應(yīng)需要一定的條件才能完成，這些條件主要有以下方面：一、緩沖液任何一個生化反應(yīng)都必須在一定的緩沖體系中進行，緩沖體系除了提供一定的pH緩沖能力外，還有一些有助于反應(yīng)進行的成分。PCR反應(yīng)緩沖液通常采用10mmol/LTris-HCl（pH8.3-9.0，

細胞培養(yǎng)實驗一般操作過程2024/06/12

細胞培養(yǎng)實驗一般操作過程：1、進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑

抗原抗體反應(yīng)的特性是什么2024/06/03

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行?？乖贵w反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測未知的抗原，如微生物及其

ELISA試劑盒結(jié)果的判定與報告2024/05/27

ELISA試劑盒結(jié)果的判定與報告：1、結(jié)果的判定嚴格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值（CO）進行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗及統(tǒng)計研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標準曲線，根據(jù)標準曲線計算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報告方式為“陰性”或“陽性”，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽性判定值即CO值，對于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽性，相反則判斷為陰性，然而在實際工作中經(jīng)常會出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近的人群，即E

實驗選擇合適抗體需要考慮的因素2024/05/20

抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應(yīng)B細胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實驗應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等，如果抗體說明

抗體的主要功能2024/05/13

抗體的主要功能：1、抗體能抑制病原體的生長繁殖，比如抗病菌的抗體就使入侵的病菌發(fā)生凝集，不讓病菌吸取營養(yǎng)，饑餓的病菌就不能繁殖了。2、抗體能阻止病毒或病菌靠近人體細胞，入侵者不能靠近人體細胞，就不能黏附在細胞上，它就不能破壞人體細胞，不能形成感染。3、抗體可以中和病毒，比如乙肝病毒（HBv），它的表面有一層蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，并借此黏附到人的肝細胞表面，隨之鉆進肝細胞。而抗體在HBv沒有黏附前與其相遇，兩者出現(xiàn)表面結(jié)合，這一結(jié)合非常重要，使HBv表面的蛋白質(zhì)發(fā)生改變，令其失去了黏附肝細胞的能力，不能進入

抗體制備三個階段闡述2024/05/06

抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應(yīng)B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等?？贵w的制備歷史和工藝決定了抗體的質(zhì)量和類型?？贵w制備工藝可分為三個階段：傳統(tǒng)方法免疫動物獲得抗體、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體和基因工程技術(shù)制備抗體。1、傳統(tǒng)方法免疫動物制備抗體：將通過各種方法獲得的免疫

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）體系的靈敏度提升攻略2024/04/28

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度提升攻略：1、分離高質(zhì)量RNA成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA應(yīng)保證全長并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑如EDTA或SDS等，以及盡可能減少基因組DNA污染。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息

細胞培養(yǎng)實用技巧小結(jié)2024/04/22

細胞是生命的基本單位。（除了病毒特殊一點。）細胞由細胞核組成和細胞膜還有線粒體等組成。（除了個別）小到細菌大至藍鯨。都由細胞組成。細胞培養(yǎng)實用技巧小結(jié):1.買細胞要去靠譜的地方買，一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原

微生物三種化學(xué)氣體滅菌法關(guān)鍵點2024/04/15

化學(xué)滅菌法系指利用化學(xué)藥品的氣體或產(chǎn)生的蒸汽進行殺滅微生物的方法。。同一種化學(xué)藥品的低濃度時呈現(xiàn)抑菌作用，而在高濃度時則能起殺菌作用。其殺菌機理可能是：能使微生物蛋白質(zhì)變性死亡，或與酶系統(tǒng)結(jié)合影響代謝，或改變膜壁通透性使微生物死亡等。下面詳解化學(xué)氣體滅菌法：1.環(huán)氧乙烷滅菌法環(huán)氧乙烷滅菌法是利用環(huán)氧乙烷氣體進行殺菌的方法。它是一種傳統(tǒng)的滅菌方法，可應(yīng)用于工衣滅菌、不耐加熱滅菌的藥品、醫(yī)用器具、設(shè)施、設(shè)備等的滅菌。環(huán)氧乙烷滅菌系統(tǒng)，主要有下列四項互相制約的重要因素影響滅菌效果：1）、溫度；2）、濕

開菲爾乳桿菌保藏方法分享2024/04/08

開菲爾乳桿菌保藏方法如下：1.傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細菌用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。2.液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。4.寄主保藏法用于目前尚不能

抗原抗體反應(yīng)四個特性分析2024/03/29

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行?？乖贵w反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化?？乖贵w反應(yīng)特點:抗原抗體反應(yīng)的特點主要有四性：即特異性、比例性、可逆性，階段性。特異性:是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補性確定的。這種高度的特異性在傳染病的診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展進

ELISA實驗假陽性結(jié)果解析2024/03/18

ELISA實驗中造成假陽性的主要四點錯誤操作：1、加樣對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋，如果加樣不準就會造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時，很小的誤差，會導(dǎo)致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本，可較好地避免以上誤差。2、洗滌在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步，應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的

PCR反應(yīng)引物設(shè)計關(guān)鍵點確定2024/03/11

PCR反應(yīng)引物設(shè)計有3條基本原則：首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，再次引物不能在模板的非目的位點引發(fā)DNA聚合反應(yīng)(即錯配)。引物設(shè)計應(yīng)注意如下要點：1、引物的長度一般為15-30bp，常用的是18-27bp，但不應(yīng)大于38，因為過長會導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TaqDNA聚合酶進行反應(yīng)。2、引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒有相似性較高，尤其是3’端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯配。引物3’端出現(xiàn)3個以上的連續(xù)堿基，如GGG或CCC，也會使錯誤引發(fā)

細胞衰老檢測方法步驟2024/03/04

細胞衰老是細胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。細胞衰老檢測方法步驟及注意事項如下：1、細胞衰老檢測方法與步驟：（1）細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃5%CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長。（2）在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。（4）吸棄

ELISA試劑盒樣本稀釋倍數(shù)的確定指南2024/02/26

一個準確的ELISA檢測實驗，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒、造模成功并準確采集的樣本、可控環(huán)境且嚴謹實驗操作，三者缺一不可。在操作過程中，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題，需要進行樣本稀釋。ELISA試劑盒樣本稀釋倍數(shù)的確定：1、嚴格意義上，每次檢測樣品都要帶標準品，擬合標準曲線，原因是每次檢測都要受不同條件的影響，比如人為操作，環(huán)境的變化等。2、不能節(jié)約，建議您盡量把樣本同時檢測。3、一般來說，ELISA試劑盒是不需要稀釋的，除非你的測定值超過標準品的上限，這樣推算出來的結(jié)果可能誤差較大，然后你根據(jù)