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預(yù)防PCR反應(yīng)被污染的方法2023/09/08: 1、合理分隔實(shí)驗(yàn)室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行，特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)與其它步驟嚴(yán)格分開。最好能劃分①標(biāo)本處理區(qū);②PCR反應(yīng)液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴(kuò)增區(qū);④PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實(shí)驗(yàn)用品及吸樣槍應(yīng)專用，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將實(shí)驗(yàn)室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。2、吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)或粘上槍頭是一個嚴(yán)重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一

大鼠源細(xì)胞常見的污染源追蹤及解決2023/08/28: 細(xì)胞污染一般可分為微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、細(xì)菌、支原體等。而真核生物一般是細(xì)胞系間的交叉污染。細(xì)胞常見的污染情況總結(jié)如下：1、細(xì)菌污染細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，其大小以微米(μm)計(jì)。常見的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。一旦發(fā)生細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯混濁現(xiàn)象；有時靜置的培養(yǎng)液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒檢測方法步驟2023/08/21: PCR檢測方法包括以下步驟：1、產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；2、待測樣本與步驟1所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。其中步驟1為：將參照基因與待測目的基因片段等比例

凍干多肽的溶解詮釋2023/08/17: 凍干多肽的溶解：1、溶解多肽的*個原則是使用無菌蒸餾水或去離子水，應(yīng)溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化，應(yīng)溶于無氧的水中，無氧水可通過注入惰性氣體（氮、氦、氬）減壓除氣得到；2、若多肽不溶于純水，超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。3、若多肽含有多個堿性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液：對于疏水性強(qiáng)的多肽，應(yīng)使用50%的乙酸；4、若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基ma啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩

抗體的作用機(jī)理及主要功能2023/08/01: 抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，是一種免疫球蛋白。它的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細(xì)胞相互作用，使淋巴細(xì)胞中的B細(xì)胞增殖分化而形成漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞），漿細(xì)胞可產(chǎn)生分泌抗體?？贵w的分類：按作用對象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細(xì)胞抗體。1、抗體的作用機(jī)理：(1)抗體在抗原顆粒和吞噬細(xì)胞之間“搭橋”，從而加強(qiáng)了吞噬細(xì)胞的吞噬作用。(2)抗體與相應(yīng)顆粒性抗原結(jié)合后，改變抗原表面電荷，降低吞噬細(xì)胞與抗原之間的靜電斥力。(3)抗體可中和某些

小鼠雜交瘤細(xì)胞HB Hepama-1細(xì)胞傳代培養(yǎng)2023/07/17: 小鼠雜交瘤細(xì)胞HBHepama-1細(xì)胞傳代培養(yǎng)一、原理細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。二、操作步驟1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。2、加入0.5—1ml0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓

定性檢測目的蛋白時細(xì)胞樣品制備2023/07/10: 原始樣品可為細(xì)胞、組織、培養(yǎng)上清、免疫沉淀或親和純化的蛋白，以下為定性檢測目的蛋白時細(xì)胞樣品的處理方法，其余的樣品制備方法參閱相關(guān)文獻(xiàn)。1．培養(yǎng)細(xì)胞或藥物處理。2．棄培養(yǎng)基，用1XPBS漂洗細(xì)胞2次，去盡殘留培養(yǎng)基。3．加入1XSDS樣品緩沖液(6-wellplate,100μl/w或75cm2plate,500-1000μl/瓶)，刮落細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到Ep管。注意：冰上操作。4．超聲10~15秒剪切DNA以減低樣品粘性。5．煮沸樣品5minutes。6．離心12000g,5min，取上清。7．電泳

普通抗體的分類概述2023/06/26: 按照不同的分類方式，抗體可以分成許多類型，目前常用的分類方式將普通抗體按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分為IgG、IgM、IgA、IgE、IgD五類。--IgG是血清中一種主要的Ig，含量占總Ig的65—75%左右。廣泛分布于組織液中，血管內(nèi)、外間隙中分布量大體相當(dāng)。是機(jī)體抗感染的一種重要物質(zhì)。--IgM是成熟胎兒合成的第一類Ig，也是在感染或免疫后最早產(chǎn)生的Ig，5類Ig中IgMzui強(qiáng)，故其細(xì)胞毒活性和細(xì)胞溶解活性也zui強(qiáng)。天然的血型抗體是IgM，有些自身抗體如抗磷脂抗體、RF等也屬于IgM。胎兒臍

牛BGH基因核酸檢測試劑盒PCR反應(yīng)五要素2023/06/12: 牛BGH基因核酸檢測試劑盒PCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。③引物堿基：G+C含量以40-60

抗體按理化性質(zhì)分的五種類簡介2023/06/05: 抗體(英語:antibody)是相對于抗原來說的，抗原簡單的說就是侵入人體的細(xì)菌或者是病毒。當(dāng)細(xì)菌或者是病毒侵入人體之后就會引起人體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一些消滅細(xì)菌或者是病毒的成分，這個成分在醫(yī)學(xué)上就稱為是抗體。抗體是針對某一種特殊的細(xì)菌病毒所產(chǎn)生的，所以并不是對所有的細(xì)菌病毒都有效果。按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能，可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體。它們在與抗原結(jié)合后啟動補(bǔ)體的級聯(lián)反應(yīng)。它們還把入侵者相互連接起來，聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬；IgG抗

ELISA結(jié)果酶標(biāo)板整體背景高解答2023/05/29: ELISA結(jié)果酶標(biāo)板整體背景高原因與解決方案1、抗體非特異性結(jié)合——應(yīng)確保板孔進(jìn)行了封閉并且使用的是恰當(dāng)?shù)姆忾]液以防止非特異性結(jié)合。2、底物結(jié)合濃度過高——對底物進(jìn)行適當(dāng)稀釋。3、反應(yīng)時間過長——當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀數(shù)時立即使用終止液終止反應(yīng)，適當(dāng)縮短顯色時間。4、底物溶液污染——正常底物溶液應(yīng)是澄清透明的，若出現(xiàn)黃色或其他顏色表明受到污染，應(yīng)更換新的底物溶液。5、底物孵育過程沒有避光——底物孵育應(yīng)在避光條件下進(jìn)行。

PCR引物退火溫度綜述2023/05/23: 引物退火溫度引物的另一個重要參數(shù)是熔解溫度（Tm）。這是當(dāng)50％的引物和互補(bǔ)序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時的溫度。Tm對于設(shè)定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設(shè)定比引物的Tm低5℃。設(shè)定Tm有幾種公式。高鹽溶液中的雜交，適用于小于18堿基的引物。根據(jù)GC含量估算Tm。確定引物Tm最可信的方法是近鄰分析法。這種方法從序列一級結(jié)構(gòu)和相鄰堿基的特性預(yù)測引物的雜交穩(wěn)定性。大部分

科學(xué)保存血清要點(diǎn)匯集2023/05/15: 科學(xué)保存血清要點(diǎn)匯集如下：1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.2、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)

ELISA檢測實(shí)驗(yàn)樣本的使用說明2023/05/08: ELISA的檢測目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計(jì)劃。ELISA樣本的處理：1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如有沉淀形成，應(yīng)再次離心3.尿液：用

無血清細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用指南2023/05/04: 經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入成份wan全明確的或部分明確的血清替代成份，達(dá)到既能滿足動物細(xì)胞培養(yǎng)的要求，又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serumfreemedium，SFM）中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細(xì)胞貼壁生長，包括以下幾大類物質(zhì)：1、促貼壁物質(zhì)：一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘

細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)步驟2023/04/23: 細(xì)胞遷移即細(xì)胞劃痕法，是測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層

ELISA試劑盒加樣時問題解析2023/04/20: ELISA試劑盒加樣時可能遇到的問題：1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。ELISA試劑盒相應(yīng)解決辦法：1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘。2、標(biāo)本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘。3、若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-2

ELISA實(shí)驗(yàn)試劑的預(yù)備事項(xiàng)2023/04/11: ELISA試驗(yàn)成功的條件之一是試劑的預(yù)備是否充沛、保存是否正確。那么ELISA實(shí)驗(yàn)試劑的預(yù)備事項(xiàng)如下：1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和運(yùn)用：在運(yùn)用前2小時內(nèi)預(yù)備。將凍干品管內(nèi)參加1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋。不稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)運(yùn)用。2、生物su符號抗體工作液：在運(yùn)用前2小時內(nèi)預(yù)備。1）．依據(jù)每孔需求0.1ml核算總的用量（實(shí)踐制造時應(yīng)多制造0.1-0.2ml）。2）．按10ul生物su符號抗體稀釋液990ul的份額制造工作液。悄悄混勻。3、親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的預(yù)備：在運(yùn)用

PCR反應(yīng)條件把控2023/03/20: PCR反應(yīng)條件的把控1.PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應(yīng)溫度（1）變性溫度和時間95℃，30s。（2）退火溫度和時間低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。（3）延伸溫度和時間72℃，1min/kb(10kb內(nèi)）。（4）Tm值=4(G+C)+2(A+T

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循原則總結(jié)2023/03/13: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：1、引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。2、引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸

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