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PCR反應溫度控制設置2022/09/19

在PCR自動熱循環(huán)中，關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環(huán)，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應管類型、壁厚、反應混合液體積、熱源(水浴或加熱塊)以及兩步驟間的溫度差，在設置熱循環(huán)時應充分給以重視和考慮，對每一儀器均應進行實測。關(guān)于熱循環(huán)時間的

細菌在培養(yǎng)基上生長特性2022/09/13

細菌在培養(yǎng)基上生長特性:1．固體培養(yǎng)基標本或液體培養(yǎng)物劃線接種到固體培養(yǎng)基表面后，單個細菌經(jīng)分裂繁殖可形成一個肉眼可見的細菌集團，稱為菌落（colony）。①菌落的形態(tài)特征：大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）、突起或扁平、凹陷、邊緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。據(jù)細菌菌落表面特征不同，可將菌落分為3型：A.光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離的細菌

新生牛血清的生產(chǎn)工藝2022/09/05

新生牛血清的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：1、選取淺黃色、澄清且粘稠的原料血清，原料血清采集自出生14小時內(nèi)未進食的新生牛中，上述原料血清pH值為6.8～8.0，蛋白質(zhì)含量為3.5％～5.0％，細菌內(nèi)毒素低于10EU/mL，將原料血清在低于-15℃的條件下進行入庫保存。2、將原料血清移入融化間進行融化，融化間的不銹鋼多層架先擦洗干凈，再用75％酒精清潔消毒，融化間溫度為18～26℃，待融化狀態(tài)為98％左右，實時巡查剔除破漏血袋。采用純凈水對原料血清包裝袋進行清洗，然后在-5℃～-2℃的條件下保存。3、

淺析qPCR反應中的Ct值2022/08/30

閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號大于熒光閾值時PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個循環(huán)的熒光值設為基線（baseline），是由于測量的偶然誤差引起的。閾值（threshold）一般是基線的標準偏差的10倍。在實際操作中也可以手動調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號被認為是真實的信號，用于定義Ct值。Ct會受到閾值的影響，每次試驗由于樣品和儀器的不同會導致基線不同，進而影響閾值和Ct值。模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在一定線性關(guān)系,起始模板量濃度越高，Ct值

ELISA實驗在洗滌過程中注意事項2022/08/22

ELISA在洗滌過程中需注意以下事項：1、板要平整，尤其是在用洗板機洗板的過程中，往往是3排一起洗，如果板不平，就很可能造成洗液有殘留，從而導致非特異性結(jié)合不能清除干凈，對實驗結(jié)果造成干擾。2、洗液溫度，實驗表明，洗液溫度也會影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板”問題。因此，最好保持室溫在20℃-30℃。3、洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。4、洗液要新鮮配置，洗液要臨用前新鮮配制，放置時間過長易產(chǎn)生絮狀物或混濁，造成賭孔或花板。5、洗板次數(shù)不夠或洗滌間隔時間過

PCR反應引物的延伸2022/08/15

PCR反應引物的延伸：DNA模板-引物復合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條與模板DNA鏈互補的新鏈。引物延伸溫度的選擇取決于DNA聚合酶的最適溫度,一般為70～75℃。延伸所需要的時間取決于模板DNA的長度。一般在72℃條件下，TaqDNA聚合酶催化的合成速度大約為40～60個堿基/秒,其速度取決于緩沖溶液的組成、ph值、鹽濃度與DNA模板的性質(zhì)。PCR的三個反應步驟反復進行，使DNA擴增量呈指數(shù)上升。反應最終的DNA擴增量

抗球蛋白試驗原理及應用2022/08/08

抗球蛋白試驗原理及應用：利用抗球蛋白抗體作為第二抗體起橋聯(lián)作用，鏈接與紅細胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細胞凝集，用于檢測抗紅細胞不*抗體。直接Coombs試驗：新生兒溶血癥，自身免疫性溶血癥，特發(fā)性自身免疫性貧血（患者紅細胞上不*抗體）間接Coombs試驗：檢測母體Rh（D）抗體，紅細胞不相容輸血后產(chǎn)生的血型抗體測定（血清中游離的不*抗體）由于不*抗體只能與一個RBC的決定簇結(jié)合，而不能同時與兩個RBC的決定簇結(jié)合，而抗球蛋白抗體作為第二抗體可達到連接與RBC表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使RBC

細胞培養(yǎng)的優(yōu)勢特點2022/08/01

細胞培養(yǎng)的優(yōu)勢特點：1.研究的對象是活細胞在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化

幾種具有不同特異性的二抗總結(jié)2022/07/25

下面總結(jié)了幾種具有不同特異性的二抗：針對整個抗體分子（H＋L）具有特異性：如anti-IgG(H+L)，此類抗體既可以與抗體的重鏈結(jié)合也可以與輕鏈結(jié)合，即與抗體分子的Fc，F(xiàn)(ab')2/Fab部分均可反應，anti-IgG(H+L)也可以與其他免疫球蛋白家族反應（如IgM和IgA），因為所有的免疫球蛋白都具有相同的輕鏈（κ鏈或λ鏈）。針對Fab片段具有特異性：這類抗體與重鏈輕鏈均可以結(jié)合，由于它們可以與輕鏈反應，它們同時也可以和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應。針對Fc片段或重鏈具有特異

標準的PCR三個基本反應步驟2022/07/18

類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火（復性）--延伸三個基本反應步驟構(gòu)成：1、模板DNA的變性（90℃-95℃）：模板DNA經(jīng)加熱至90~95℃一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應作準備，雙鏈DNA在高溫作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。2、模板DNA與引物的退火（復性）（60℃-65℃）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至50~60℃，引物與模板DNA單鏈的互補序

一抗的選擇考慮因素2022/07/12

抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實驗應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等，如果抗體說明

熒光素標記抗體鑒定及應用范圍2022/07/05

熒光素標記抗體鑒定：1、抗體的效價鑒定：鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。2、抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計

解決細胞成團問題幾種方式2022/06/28

細胞抱團是利用細胞培養(yǎng)瓶進行細胞培養(yǎng)時的常見問題，細胞成團后將影響細胞的正常生長與繁殖，那么，如果出現(xiàn)這種情況該如何解決呢？首先，細胞成團并不一定都會影響細胞培養(yǎng)進程。如果細胞輪廓清晰胞體通透，呈串狀均勻聚集，證明細胞的生長狀態(tài)良好。但多數(shù)情況下，聚團的細胞都是輪廓模糊、透光性差，甚至會出現(xiàn)合胞體，伴有細胞碎片，這證明細胞已經(jīng)衰老或產(chǎn)生病變，狀態(tài)不佳。解決細胞成團問題可以通過以下幾種方式：1、如果細胞抱團不影響生長就沒問題，只是計數(shù)時較麻煩。在消化時，可在細胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕細胞培

ELISA實驗操作規(guī)范原則2022/06/21

ELISA試劑盒實驗操作中的原則有哪些呢？一、隨機原則：即運用“隨機數(shù)字表"實現(xiàn)隨機化；運用“隨機排列表"實現(xiàn)隨機化；運用計算機產(chǎn)生“偽隨機數(shù)"實現(xiàn)隨機化。盡量運用統(tǒng)計學知識來設計自己的實驗，減少外在因素和人為因素的干擾。二、照原則：空白對照組的設立——只有通過對照的設立我們才能清楚地看出實驗因素在當中所起的作用。當某些處理本身夾雜著重要的非處理因素時，還需設立僅含該非處理因素的實驗組為實驗對照組；歷史或中外對照組的設立一一這種對照形式應慎用，其對比的結(jié)果僅供參考，不能作為推理的依據(jù)；多種對照形

大鼠α2抗纖溶酶elisa定量檢測試劑盒夾心法操作步驟2022/06/14

大鼠α2抗纖溶酶elisa定量檢測試劑盒實驗夾心法操作步驟實驗開始前，各試劑和樣本均應平衡至室溫；樣本復融后需再次離心，取上清檢測；試劑或樣本配制時，需充分混勻并盡量避免起泡；標曲和樣本建議做復孔檢測。1.加樣：將標準品工作液依次加入到前兩列孔中，每個濃度的工作液并列加兩孔，每孔100μL。待測樣品加入到其他孔，每孔100μL(若樣本濃度高于檢測范圍，需用標準品&樣本稀釋液稀釋后取樣)。給酶標板覆膜，37℃孵育90分鐘。提示：加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，避免產(chǎn)生氣泡

凍存原代細胞的培養(yǎng)過程2022/06/10

凍存原代細胞的培養(yǎng)過程：1.將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。2.將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。3.將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。4.用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。5.打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開

大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素elisa試劑盒性能及特點2022/06/07

試劑盒性能：1.靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細胞因子反應。3.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。試劑盒特點：1、高效、靈敏、特異的抗體；2、重復性和可靠性高；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型；5、可檢測指標齊全：細胞因子檢測、心肌梗塞檢測、內(nèi)分泌檢測、肝纖維化檢測、自身免疫檢測、腫瘤標志物檢測、傳染病檢測、特種

培養(yǎng)基依照用處分類2022/05/31

如今培養(yǎng)基種類繁多，它能夠按成分、物理狀況、用處等方面來區(qū)別，依照用處能夠分為根底培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、養(yǎng)分培養(yǎng)基、挑選培養(yǎng)基四大類。一、鑒別培養(yǎng)基是一類含有某種特定化合物或試劑的培養(yǎng)基。某種微生物在這種培養(yǎng)基上培育后，它所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與這種特定的化合物或試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反應，依據(jù)這一特征性反應能夠?qū)⒛撤N微生物與其他中微生物區(qū)別開來。主要用于不同類型微生物的快速鑒定，如用來查看細菌能否產(chǎn)生硫化氫的醋酸鉛培養(yǎng)基。二、根底培養(yǎng)基含有一般細菌成長繁殖需求的基本的養(yǎng)分物質(zhì)。常用的根底培養(yǎng)基

標記熒光抗體常用Marsshall法方法及步驟2022/05/23

標記熒光抗體常用Marsshall法方法及步驟：一、材料抗體球蛋白溶液、0．5mol／L(pH9．0)碳酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、異硫氰酸熒光素、1％硫柳汞水溶液、50ml小燒杯、4℃冰箱、電磁攪拌器、透析袋、玻棒、pH7．2或3．0的0．01mol／LPBS等。二、方法及步驟抗體的準備取適量已知濃度的球蛋白溶液于燒杯中，再加人生理鹽水及碳酸鹽緩沖液，使最后免疫球蛋白濃度為20mg／ml，碳酸鹽緩沖液容量為總量的1／10，混勻，將燒瓴置電磁攪拌器上(速度適當以不起泡沫為宜)5～10min。熒光素

基質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體實驗原理2022/05/17

基質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體實驗原理:（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。（2）活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。（3）結(jié)合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細胞，參與免疫應答。（4）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎