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ELISA實際測定操作中溫育注意事項2024/01/29: 溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。溫育這一步是臨床ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃30分鐘～1小時，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃1～2小時才能

上下游引物具體是什么？2024/01/22: 引物（Primer）在聚合作用的起始時，可以刺激合成另一種大分子，并與反應(yīng)物以共價鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補的區(qū)域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。體外人工設(shè)計的引物被廣泛用于聚合酶鏈反應(yīng)、測序和探針合成等。自然中存在有生物的DNA復(fù)制引物（RNA引物）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）中人工合成的引物（通常為DNA引物）。一般所說引物，指DNA引物，以下簡稱引物。上游引物：DNA分子兩端不

小鼠N端前腦鈉素elisa檢測試劑盒處理保存方法2024/01/15: 小鼠N端前腦鈉素elisa檢測試劑盒處理保存方法：一、血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則能夠在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下。二、標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。三、要注意防止呈現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，然后與后面加入的HRP底物反響顯色。四、冰凍保存的血清標(biāo)

培養(yǎng)基的制備2024/01/08: 培養(yǎng)基的制備:1.培養(yǎng)基用水培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。2.稱量稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。3.復(fù)水復(fù)水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長;容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基

各用途培養(yǎng)基概述2024/01/02: 培養(yǎng)基培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽以及維生素和水等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基)，較長時間的貯存，必須放在3~6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。按用途培養(yǎng)基用途可分為孢子培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基三種。1、孢子培養(yǎng)基，孢子培養(yǎng)基

PCR熱循環(huán)之變性與退火溫度選擇2023/12/25: 在PCR自動熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環(huán)，擴(kuò)增片段500bp。在這里，每一步的時間應(yīng)從反應(yīng)混合液達(dá)到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應(yīng)管類型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加熱塊)以及兩步驟間的溫度差，在設(shè)置熱循環(huán)時應(yīng)充分給以重視和考慮，對每一儀器均應(yīng)進(jìn)行實測。關(guān)于熱循環(huán)時間

ELISA測定標(biāo)本重點需注意事項2023/12/18: 用于ELISA測定的標(biāo)本最為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如ke的松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其

RT-PCR 實驗中的逆轉(zhuǎn)錄酶三種活性2023/12/04: 逆轉(zhuǎn)錄是指以RNA為模板，合成與其互補的cDNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄PCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）相結(jié)合的技術(shù)，故逆轉(zhuǎn)錄稱為RT-PCR或反轉(zhuǎn)錄PCR。逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于RNA病毒體內(nèi)的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實驗中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性1.依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈；2.Rnase水解活性：水解Rnase雜合體中的RNA;3.依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA

培養(yǎng)細(xì)胞被污染清除方法2023/11/28: 培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemovalAgent）處理細(xì)胞，每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康，效果好。2、用清洗純化法清除支原體污染的方法細(xì)胞營養(yǎng)馴化→細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個

ELISA試驗標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制注意事項2023/11/20: ELISA試驗標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制注意事項：1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。3、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的

實時熒光定量PCR檢測方法2023/11/13: 如要對DNA、RNA樣品進(jìn)行精確定量研究，就需要采用實時熒光定量PCR，根據(jù)檢測實時熒光PCR產(chǎn)物的方式不同，實時熒光定量PCR主要有DNA結(jié)合染料法、基于探針的化學(xué)法、淬滅染料引物法等類型。1.DNA結(jié)合染料法原理：應(yīng)用一種帶有熒光的、非特異的DNA結(jié)合染料檢測PCR過程中積累的擴(kuò)增產(chǎn)物。應(yīng)用于核算定量和基因表達(dá)驗證。優(yōu)缺點：它們的優(yōu)點是可以對任何雙鏈DNA進(jìn)行定量，不需要探針，具有相對高的靈敏度和可靠性，并且成本低，簡單易用，缺點是它們能在反應(yīng)中結(jié)合所有的DNA雙鏈，其中包括在PCR過程中產(chǎn)

細(xì)胞狀態(tài)不好原因及解決方案2023/11/06: 細(xì)胞是生物體形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動的基本單位。通常認(rèn)為細(xì)胞是人體的最小單位，它是由許多更小的具有自身功能的結(jié)構(gòu)組成。盡管人類細(xì)胞大小不等，但所有的細(xì)胞均很小。即使是最大的細(xì)胞如受精卵，也是肉眼所不能見到的。細(xì)胞狀態(tài)不好可能原因：一、細(xì)胞本身的狀態(tài)1.細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；2.細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；3.細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；4.1酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未全分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；5.細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速溶。二、污染1

大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞分離與培養(yǎng)2023/10/30: 大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞分離與培養(yǎng)：1、無菌條件下，取出1-3d齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；2、往組織塊中加入4mL酶消化液（0.1%和0.1%I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10%FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；4、用

大鼠肌鈣蛋白T酶聯(lián)免疫試劑盒樣品收集2023/10/23: 大鼠肌鈣蛋白T酶聯(lián)免疫試劑盒樣品收集:1.血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，

細(xì)胞培養(yǎng)三種方式分享2023/10/17: 細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個必須的過程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞膜，模擬體內(nèi)生存環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下，使其生長繁殖并維持結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。目前細(xì)胞培養(yǎng)方式主要包括以下三種：1、貼壁培養(yǎng)貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性細(xì)胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學(xué)作用的物質(zhì)（玻璃或塑料等無活性物質(zhì)）的表面生長、生

PCR熒光定量檢測試劑盒PCR反應(yīng)引物純化方式選擇2023/10/08: PCR熒光定量檢測試劑盒PCR反應(yīng)引物純化方式選擇：1、脫鹽寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu)，首先必須去除保護(hù)基團(tuán)。通過濃氨水處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護(hù)基團(tuán)，以及堿基的保護(hù)基團(tuán)基（苯甲酰基和異丁基）被去除，從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而，必要的去保護(hù)步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機(jī)化合物。所有非必須有機(jī)化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進(jìn)行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機(jī)雜質(zhì)

小鼠ELISA檢測試劑盒樣本處理及要求2023/10/05: 小鼠ELISA檢測試劑盒樣本處理及要求：1.血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的科學(xué)管理規(guī)則2023/09/25: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理:1、規(guī)范記錄建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)臺帳，定期更新臺賬，明確責(zé)任主體，以便做到可以追本溯源；領(lǐng)用時，記錄好領(lǐng)用時的名稱、數(shù)量、時間、領(lǐng)用人、發(fā)放人等必要的信息；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)在有效期內(nèi)使用，應(yīng)定期檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期，對于超限的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要填寫銷毀登記表；建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檔案。2、定期核查對于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類、級別、介質(zhì)、濃度含量、有效期、批號、環(huán)境條件、儲存方法、帳物相符等等各參數(shù)，要定期核查。定期檢查實驗室各檢測項目所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否相符。對新增檢測項目所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)及時納入規(guī)范管理。存放環(huán)境

人腦腸肽ELISA試劑盒實驗中血漿的收集處理2023/09/18: ELISA實驗中血漿的采集、處理和保存:1、真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；2、按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸na），30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；3、將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心5min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。4、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月；5、根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測定。請

細(xì)胞凋亡方法步驟2023/09/11: 細(xì)胞凋亡方法步驟：1、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡（1）實驗前約24小時，接種兩瓶HL-60細(xì)胞，標(biāo)記①、②，每瓶含約6ml培養(yǎng)液，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（2）實驗前約2.5小時，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%，①號瓶加入三尖杉酯堿200μl，使終濃度為1μg/ml，②號瓶中加入同等量PBS（pH7.4）作對照。共同放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2.5小時。2、Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細(xì)胞（1）染色：將瓶中的細(xì)胞搖勻取200μl于1.5ml的離心管中，加入Ho33342母液2μl，PI20

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