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細(xì)胞傳代技術(shù)實驗原理2024/11/18
細(xì)胞傳代技術(shù)實驗原理：當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，將會出現(xiàn)密度抑制現(xiàn)象，表現(xiàn)為細(xì)胞的生長和分裂速度逐漸減慢，甚至停止。貼壁細(xì)胞會在培養(yǎng)瓶中長成致密單層(懸浮細(xì)胞會充滿整個體積的培養(yǎng)液)，鋪滿培養(yǎng)瓶底部，此時如果不及時進(jìn)行分裝再培養(yǎng)，即傳代培養(yǎng)，細(xì)胞將逐漸走向衰老、死亡，將培養(yǎng)的細(xì)胞從一個容器以適當(dāng)比率轉(zhuǎn)移到其他容器中擴(kuò)大培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。首先，我們需要準(zhǔn)備好相應(yīng)的實驗器材：裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、yi酶、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸。至于其他的超凈
總蛋白酶活性試劑盒實驗測定步驟2024/11/04
測定步驟：一.加樣1.除包被外都需45度加樣2.加樣體積要準(zhǔn)確3.管底加樣，不能加在管壁上4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡二.溫浴1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時，即可終止酶反應(yīng)。三.洗滌1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻是決定實驗成敗的
?核酸檢測試劑盒總RNA提取流程2024/10/28
核酸檢測試劑盒總RNA提取：取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入試劑，嚴(yán)格按照說明書的流程進(jìn)行。(1)加試劑（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。(2)移入1.5mlEP管中，4oC13000g離心10min。(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。(4)加入0.2ml1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。(5)4oC12000g離心15min。(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。(7)加入0.
小鼠8羥基脫氧鳥苷ELISA試劑盒操作步驟2024/10/21
小鼠8羥基脫氧鳥苷ELISA試劑盒操作步驟:1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物su標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。4）甩去孔內(nèi)
血清的優(yōu)點和缺點小結(jié)2024/10/14
血清是非常復(fù)雜的混合物，成分多樣，含有各種生理平衡的分子量差別很大的生物分子，有的對細(xì)胞生長有促進(jìn)作用，如含有攜帶激素、礦物質(zhì)、微量元素和脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運蛋白等。血清能夠提供細(xì)胞貼壁因子和擴(kuò)散因子。血清中含有起穩(wěn)定作用和解毒的因子，能夠維持培養(yǎng)基的pH值并抑制蛋白酶直接或間接的酶解。但是血清的加入也帶來了很多問題：1、血清的成份可能有幾百種之多，目前對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識，這給研究工作帶來許多困難；2、血清都是批量生產(chǎn)，各
小鼠ELISA檢測試劑盒特點優(yōu)勢2024/10/09
小鼠ELISA檢測試劑盒特點優(yōu)勢：1.試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評價。2.靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。3.特異性：常用小鼠Elisa試劑盒交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。4.精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。5.準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行
PCR反應(yīng)體系的組成與優(yōu)化2024/09/29
PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。1．反應(yīng)緩沖液：一般隨TaqDNA聚合酶供應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液含：50mMKCl，10mMTris-HCl（pH8.3室溫），1.5mMMgCl2。Mg2+的濃度對反應(yīng)的特異性及產(chǎn)量有著顯著影響。濃度過高，使反應(yīng)特異性降低；濃度過低，使產(chǎn)物減少。在各種單核苷酸濃度為
ELISA檢測試劑盒變質(zhì)原因探究2024/09/24
ELISA檢測試劑盒變質(zhì)是ELISA實驗中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)的一些原因現(xiàn)為大家詳細(xì)探究下。1、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。2、樣本因素標(biāo)本干擾因
培養(yǎng)基的制備一般過程2024/09/18
培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。培養(yǎng)基的制備一般過程：1.培養(yǎng)基用水培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。2.稱量稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。3.復(fù)水復(fù)水時不
RNA直接法提取具體操作過程2024/09/09
1）加入1mlTrizol試劑，混勻，冰上孵育10min。2）4℃，12000rpm離心10min，小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。3）加入200ul氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育5min。4）4℃，12000rpm離心15min。混合液分三層，包括最下面的C6H5OH-氯仿有機(jī)相，中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管（大約60％體積的Trizol），不要吸取中間相，可留下少量上層液體?。∟ote：質(zhì)量比數(shù)量更重要?。?）加入等體積的異丙醇，輕輕地顛倒混勻約10次，室溫放置10m
熒光定量PCR儀選擇關(guān)注要素2024/09/02
熒光定量PCR儀選擇關(guān)注要素：1、儀器的檢測通量在購買定量PCR儀的時候要根據(jù)實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測，實在不必購買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標(biāo)記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經(jīng)費有限無法購買384孔板儀器的實驗室，可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系
ELISA試劑盒血清應(yīng)用注意事項2024/08/26
ELISA試劑盒血清應(yīng)用注意事項：1、請勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。2、按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4、隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻，溫度過
RT-PCR選擇合適的RT Primer分析2024/08/19
RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)，也稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR，是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。RT-PCR選擇合適的RTPrimer分析如下：1、OligodT選擇OligodT時，要求RNA必須有PolyA，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，最好不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議
小鼠白介素elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法操作流程2024/08/12
小鼠白介素elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法操作流程：1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.
源性RNA酶污染RNA制品途徑2024/08/05
外源性RNA酶可以通過下述途徑污染RNA制品：1、玻璃制品、塑料制品和電泳槽滅菌的一次性使用的塑料制品基本上無RNA酶，可以不經(jīng)預(yù)處理直接用于制備和貯存RNA。實驗室用的普通玻璃器皿和塑料制品經(jīng)常有RNA酶法染，使用前必須于180℃干烤８小時或更長時間（玻璃器皿）或用氯仿沖洗（塑料制品）。另一種方法是用0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制備RNA的燒杯，試管和其他用品。DEPC是RNA酶的強(qiáng)烈抑制劑，但其作用并不是絕對的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌滿DE
CFH大鼠補(bǔ)體因子HELISA試劑盒運用過程2024/07/30
CFH大鼠補(bǔ)體因子HELISA試劑盒運用過程:1.大鼠ELISA試劑盒用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮.2.用戶在初度運用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底.3.每次試驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4.丈量時先用此孔調(diào)OD值至零.4.要確保微量加樣器的精確性,能夠運用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定（因為蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水能夠看作是lg200L的水能夠看作是0.2g）每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui
PCR技術(shù)步驟構(gòu)成2024/07/22
PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：1、模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；2、模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；3、引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如Taq
科研凍存細(xì)胞收集處理過程2024/07/15
科研凍存細(xì)胞收集處理過程：1、收到快遞后，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無干冰，請拍照后及時聯(lián)系供貨商。2、收到細(xì)胞后請盡快復(fù)蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時需提供。3、復(fù)蘇細(xì)胞時不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴鍋處于實驗室暴露、高溫、濕潤環(huán)境，極易滋生各種微生物，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生，大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍
血清各類別不同點2024/07/08
血清各類別不同點：血清，作為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要研究對象，其各類別之間存在著微妙的差異。這些差異不僅反映了血清的內(nèi)在特性，更在疾病診斷、治療及預(yù)防中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。首先，從來源上看，血清可以分為動物血清和人血清兩大類。動物血清，如牛血清、羊血清等，其成分與人血清有所不同，因此在某些醫(yī)學(xué)實驗中可以作為替代物使用。然而，由于種屬差異，動物血清在某些情況下可能無法全模擬人血清的生理作用，因此在使用時需謹(jǐn)慎。人血清則因其與人體的天然匹配性而備受關(guān)注。在人體內(nèi)，血清的成分和濃度會隨著年齡、性別、生理狀態(tài)
豬圓環(huán)病毒檢測試劑盒(熒光 PCR 法)PCR反應(yīng)特點2024/07/01
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。PCR反應(yīng)特點有下列四個：1、特異性強(qiáng)PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；②堿基配對原則；③TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實
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