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豬圓環(huán)病毒檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)PCR反應(yīng)特點(diǎn)2024/07/01: PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。PCR反應(yīng)特點(diǎn)有下列四個(gè)：1、特異性強(qiáng)PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；②堿基配對(duì)原則；③TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)

ELISA試劑盒變質(zhì)原因探究2024/06/24: ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)的一些原因現(xiàn)為大家詳細(xì)分析下。1、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。2、樣本因素標(biāo)本干擾因素包

IgM與IgG抗體的不同點(diǎn)小結(jié)2024/06/18: IgM與IgG是人體血液中常見的兩種免疫球蛋白。IgM是個(gè)體發(fā)育中zui先出現(xiàn)的抗體，也是抗原入侵時(shí)機(jī)體制造的第一類抗體，在免疫應(yīng)答早期階段發(fā)揮重要功能。IgG是人體血清免疫球蛋白的主要成分，是初級(jí)免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，大多抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG。其中，IgM是血清中的免疫球蛋白M，IgG是血清中的免疫球蛋白G。IgM和IgG的區(qū)別是：作用不同、功能不同以及生理變化不同。一、作用不同1、IgM是免疫球蛋白M，根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同將免疫球蛋白分為五種，IgM是人的免疫球蛋白之一。

細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)闡述2024/06/12: 細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)是細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜。細(xì)胞分為動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌和植物細(xì)胞。細(xì)胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細(xì)胞中才能體現(xiàn)。動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)：動(dòng)物細(xì)胞有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)包括細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞器。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞相比較，具有很多相似的地方，如動(dòng)物細(xì)胞也具有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)。但是動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞又有一些重要的區(qū)別，

ELISA試劑盒操作時(shí)的浸泡步驟2024/06/03: ELISA試劑盒操作時(shí)的浸泡步驟：1、吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液。2、用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）。3、浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短。4、吸干孔內(nèi)液體，吸干應(yīng)全，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干。5、重復(fù)操作3和4，洗滌3-4次（或按說(shuō)明規(guī)定）。6、在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。ELISA試劑盒代測(cè)時(shí)標(biāo)本需注明情況如下：1、所測(cè)項(xiàng)目2、標(biāo)本編號(hào)3、是否做復(fù)孔4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回

PCR反應(yīng)中的引物二聚體應(yīng)對(duì)方法2024/05/27: PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。如果反應(yīng)出現(xiàn)了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。1、首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下，兩步循環(huán)(由95°C變性步驟直接進(jìn)入60°C退火和延伸步驟)有利于強(qiáng)效擴(kuò)增，因此引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)定的成功退火溫度為60°C。2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下，每

實(shí)時(shí)熒光定量PCR熒光化學(xué)物質(zhì)原理簡(jiǎn)述2024/05/20: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：1.TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同

PCR反應(yīng)引物純化方式淺析2024/05/06: 1、脫鹽寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu)，首先必須去除保護(hù)基團(tuán)。通過濃氨水處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護(hù)基團(tuán)，以及堿基的保護(hù)基團(tuán)基（苯甲?；彤惗』┍蝗コ?，從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而，必要的去保護(hù)步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機(jī)化合物。所有非必須有機(jī)化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進(jìn)行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機(jī)雜質(zhì)，但它不能有效移除合成中產(chǎn)生微量的提前終止的寡核苷酸

細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢解析2024/04/28: 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢解析：1、培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長(zhǎng)所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購(gòu)買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)的方法制備培養(yǎng)基，使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照的方法制備培養(yǎng)基，或直接購(gòu)買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。2、細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(和)，但如果無(wú)菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培養(yǎng)物，建議培養(yǎng)箱全消毒。如果不

PCR反應(yīng)中主要成份引物解讀2024/04/22: PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性由一對(duì)上下游引物所決定。引物的好壞往往是PCR成敗的關(guān)鍵。引物設(shè)計(jì)和選擇目的DNA序列區(qū)域時(shí)可遵循下列原則：1、引物長(zhǎng)度約為16-30bp，太短會(huì)降低退火溫度影響引物與模板配對(duì)，從而使非特異性增高。太長(zhǎng)則比較浪費(fèi)，且難以合成。2、引物中G+C含量通常為40%-60%，可按下式粗略估計(jì)引物的解鏈溫度Tm＝4(G+C)+2(A+T)。3、四種堿基應(yīng)隨機(jī)分布，在3'端不存在連續(xù)3個(gè)G或C，因這樣易導(dǎo)致錯(cuò)誤引發(fā)。4、引物3'端最好與目的序列閱讀框架中密碼子第一或第二位核苷酸對(duì)應(yīng)，以

ELISA試驗(yàn)溫育過程詳解2024/04/15: 在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為徹d

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)包含的各方面總結(jié)2024/04/08: 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究中一個(gè)基礎(chǔ)且關(guān)鍵的技術(shù)，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)、癌癥研究等領(lǐng)域。一個(gè)全面的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)總結(jié)應(yīng)該包含以下幾個(gè)方面：1.培養(yǎng)環(huán)境溫度：大部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞在37°C下培養(yǎng)最為理想。濕度：高濕度環(huán)境有助于防止培養(yǎng)基過早蒸發(fā)，通常在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)維持相對(duì)濕度在95%以上。氣體組成：5%CO?是常用的培養(yǎng)箱氣體環(huán)境，有助于維持培養(yǎng)基pH的穩(wěn)定。2.培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基類型：液體培養(yǎng)基通常包含必需的氨基酸、糖類、維生素、無(wú)機(jī)鹽、緩沖系統(tǒng)等，不同類型的細(xì)胞可能需要特定的培

移液器操作規(guī)范與技巧2024/03/29: 移液器的工作原理是活塞通過彈簧的伸縮運(yùn)動(dòng)來(lái)實(shí)現(xiàn)吸液和放液。在活塞推動(dòng)下，排出部分空氣，利用大氣壓吸入液體，再由活塞推動(dòng)空氣排出液體。使用移液器時(shí)，配合彈簧的伸縮性特點(diǎn)來(lái)操作，可以很好地控制移液的速度和力度。一、移液器規(guī)范操作步驟:第一步設(shè)定移液體積：從大體積調(diào)節(jié)至小體積時(shí)，為正常調(diào)節(jié)方法，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)刻度即可，從小體積調(diào)節(jié)至大體積時(shí)，可先順時(shí)針調(diào)至超過設(shè)定體積的刻度，再回調(diào)至設(shè)定體積，可保證最佳的精確度。第二步裝配移液器吸頭：將移液器端垂直插入吸頭，左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)，上緊即可；注：用移液器反復(fù)撞擊吸頭

支原體污染細(xì)胞常用清除方法2024/03/25: 支原體污染細(xì)胞后，有必要清除支原體，常用方法有：1、對(duì)于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對(duì)于較為重要的細(xì)胞，如來(lái)源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中細(xì)胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2、用MRA處理：用支原體清除劑（MycoplasmaRemovalAgent）處理細(xì)胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清除支原體。3、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→上等細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作步驟2024/03/18: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：1、進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)

PCR產(chǎn)物純化效率提升考慮要素2024/03/11: PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下，可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率要點(diǎn)合集如下：1.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí)，會(huì)一定程度影響pcr效率；2.模板量，過高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性；3.引物，引物的長(zhǎng)度需要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；5.mg離子濃度，mg離子濃度過高會(huì)降低特異性，濃度過低會(huì)降低效率；6.退火溫度：退火溫度低，效率會(huì)高，但特異性降低；退火溫度高，效率降低，

ELISA實(shí)驗(yàn)洗板技術(shù)詳細(xì)說(shuō)明2024/03/04: 正確的洗滌和沖洗方案尤其重要。在下游分析過程中，不充分、不一致和/或過度清洗會(huì)造成問題。有許多洗板的方法，包括使用自動(dòng)洗板機(jī)、手動(dòng)分流器或洗瓶。當(dāng)手動(dòng)吸出孔中的液體時(shí)，要注意不要碰到孔的底部--吸管的尖應(yīng)該放在孔的一側(cè)。為了減少背景信號(hào)，清洗量需要足夠大，以去除孔中未結(jié)合的樣品和試劑。然而，過度洗滌會(huì)減少目標(biāo)信號(hào)。確保所有的孔都被平均清洗，以避免在整個(gè)檢測(cè)板上引入信號(hào)變化。要做到這一點(diǎn)，如果是手工清洗，請(qǐng)檢查移液器吸頭是否固定好，如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，所有分配和吸液的噴頭必須沒有堵塞。你可以在空板

細(xì)胞培養(yǎng)具體過程2024/02/26: 細(xì)胞培養(yǎng)：是指將活細(xì)胞（尤其是分散的細(xì)胞）在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法。細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程:一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大

標(biāo)準(zhǔn)溶液自配須具備的基本要求2024/02/18: 標(biāo)準(zhǔn)溶液（standardsolution）在滴定分析中常用作滴定劑。在其他的分析方法中用標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制工作曲線或作計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)溶液提取有兩種方法，一種是直接制備對(duì)照品，另一種是已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的校準(zhǔn)和提取。標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度，其制備條件有非常嚴(yán)格的要求?，F(xiàn)分享自配標(biāo)準(zhǔn)溶液具備的8個(gè)基本要求。自配標(biāo)準(zhǔn)溶液須具備的基本要求：1.應(yīng)采用潔凈的優(yōu)質(zhì)硬玻璃容量瓶作最終體積的容器。2、為保證標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的可靠性和準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合其要求,(應(yīng)有監(jiān)

微生物菌株復(fù)蘇操作流程及注意事項(xiàng)2024/02/05: 微生物菌株操作流程：菌株復(fù)蘇：（按三區(qū)劃線法將留菌管內(nèi)的原始菌株進(jìn)行復(fù)蘇）1、所有菌株，顯色培養(yǎng)基分4區(qū)，每區(qū)一株，標(biāo)明菌株號(hào)、菌種名常用縮寫如下：cal:白念珠菌cgl：光滑念珠菌cpa:近平滑念珠菌ctr:熱帶念珠菌ckr:克柔念珠菌cne:新型隱球菌，其他菌種標(biāo)記全名。2、隱球菌除傳顯色培養(yǎng)基以外，另傳1/2塊血平皿上述菌株統(tǒng)一37oC孵育48h菌種鑒定：（48h后觀察結(jié)果）。：l、微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔和干燥的地方,室溫放置時(shí)問過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退;2、菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行,防

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