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細(xì)胞生長緩慢解析:
1、培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子。
通常情況下,當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞,并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫的方法制備培養(yǎng)基,使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照的方法制備培養(yǎng)基,或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。
2、細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(和),但如果無菌操作觀念不強,仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞,可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然,丟棄并不是隨意的,扔進垃圾桶。應(yīng)按照實驗室生物安全規(guī)定進行。然后復(fù)蘇培養(yǎng)物,建議培養(yǎng)箱全消毒。
如果不冷凍,而且這種細(xì)胞非常珍貴,常用的治療方法是藥物治療:細(xì)菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌藥物;支原體污染再加上抗支原體藥物,具體藥物可以咨詢,他們會更加專業(yè)。
3、許多細(xì)胞的生長依賴于密度。如果傳代后細(xì)胞密度過小,也會影響細(xì)胞生長。這段時間沒有什么特別好的,就是更換液體。如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶為T75,則可以消化、離心、復(fù)蘇,然后接種到T25瓶中。
4、冷凍細(xì)胞中添加DMSO(二甲基亞砜)的量不正確,沒有逐漸梯度冷卻。下一次恢復(fù)后的細(xì)胞總是壞的。處理方法:按的冷凍保存方法制備冷凍液。部分細(xì)胞適合10% DMSO,部分細(xì)胞適合5% DMSO;嚴(yán)格遵循漸變冷卻的原則,細(xì)胞恢復(fù)后迅速解凍。
5、換液間隔時間太長。一些小伙伴真的把細(xì)胞“佛”系生長。當(dāng)他們想到它的時候,才會換下液體,相信一個句子。“你已經(jīng)是一個成熟的細(xì)胞了。你應(yīng)該學(xué)會養(yǎng)活自己,成長”。在這種情況下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中積累了大量的細(xì)胞代謝廢物,影響細(xì)胞活性。:勤奮點
6、細(xì)胞的“消化”時間不宜過長,減少對細(xì)胞的損傷;此外,EDTA一般添加到胰腺酶中,螯合鈣離子,影響細(xì)胞粘附。治療方法:控制細(xì)胞“消化”時間,盡量去除干凈的和EDTA。
PH值:細(xì)胞需要在一定的PH值下生長,這個小朋友知道。但是很多時候PH值是我們忽略的東西,這也是小秋今天想強調(diào)的一點。隨著使用時間的增加,我們使用的介質(zhì)可能會慢慢變成堿性!(當(dāng)然,它也可能變酸,但改變堿是常見的)。一般來說,過堿的培養(yǎng)基會影響細(xì)胞的生長。治療:簡單的方法就是更換新鮮的培養(yǎng)基!當(dāng)然,如果你有時間和條件,你可以調(diào)整介質(zhì)的pH值。
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