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[方法]1．將大腸桿菌TG1種到基本培養(yǎng)瓊脂板，37℃過夜。2．將基本培養(yǎng)瓊脂板上的大腸桿菌TGl再接種到含有15m12XTY培養(yǎng)基的100ml形瓶中。37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3．用5ml夜培養(yǎng)的TGl接...
1．用溶于PBS的2m1抗原（10—1000ug/m1）包被免疫管，室溫過夜。碳酸鹽緩沖液也可使用。2．用PBS洗滌試管3次，并用2％MPBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，放在旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)臺(tái)上，37℃l小時(shí)。3．...
1．使用廠商*的試劑盒對(duì)抗原進(jìn)行*化。如果用DTT洗脫，可以采用NHS—SS*。2．用2％MPBS封閉1．5ml微量離心管，室溫1小時(shí)；然后，棄去封閉緩沖液。3．在1個(gè)1．5ml微量離心管中，用2％M...
抗體基因的突變導(dǎo)人可以是隨機(jī)的，也可以在特異性位點(diǎn)上。隨機(jī)導(dǎo)人突變?yōu)楹?jiǎn)單，而且也不需要推測(cè)哪個(gè)位點(diǎn)是提高親和力的佳突變位點(diǎn)。隨機(jī)突變更接近體內(nèi)的體細(xì)胞高突變過程。導(dǎo)人隨機(jī)突變的一種常用方法是鏈改組。這...
抗體可以含有超過50個(gè)CDR殘基。因此帶來一個(gè)問題，就是選擇哪個(gè)CDR區(qū)和哪個(gè)CDR殘基進(jìn)行突變。我們和其他小組的結(jié)果都顯示：定位于VHCDR3和VLCDR3的靶向突變是用噬菌體展示提高親和力的有效方...
利用含有目標(biāo)受體的復(fù)雜混合物，對(duì)噬菌體展示肽文庫進(jìn)行篩選。這適用于許多令人感興趣的生物體系，如血清、腦脊液及其他生物性體液和細(xì)胞或組織表面等。在此情況下，目標(biāo)就是要鑒定出結(jié)合于特定受體分子或結(jié)合于一組...
在有偶合劑（couplingreagent）HATU（Sigma）和DMF（Sigma）的情況下，加入異硫氰酸熒光素I（fluoresceinisothiocyanateisomer1）（Sigma）...
如我們以前的論文所述，我們經(jīng)常將后幾輪篩選得到的序列轉(zhuǎn)移到能與大腸桿菌麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）融合表達(dá)的載體中去。這樣就能夠通過ELISA反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)（反應(yīng)信號(hào)的強(qiáng)度通常與每個(gè)克隆所編碼的肽段的親和力...
成功的初級(jí)庫篩選將會(huì)得到一個(gè)或更多的能與受體特異性結(jié)合的肽段。這些分離得到的肽段的親和性一般為比較低的微摩爾級(jí)別，從而不能在基于細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)下檢測(cè)到信號(hào)。為了提高這些初始篩選到的肽段的親和性，可以通過低...
1油的覆蓋及反應(yīng)體系的體積如果PCR儀不加熱反應(yīng)小管的管蓋，你需要在反應(yīng)混合物上覆蓋密度小的礦物油以防止蒸發(fā)。在反應(yīng)小管的管蓋總是被加熱到高于96℃的PCR儀中，可以不加礦物油進(jìn)行PCR反應(yīng)。油覆蓋得...
包含有億萬個(gè)隨機(jī)肽段序列的大容量數(shù)據(jù)庫對(duì)多種蛋白靶分子是一個(gè)豐富的資源庫，例如包含細(xì)胞因子和生長因子配體、蛋白酶抑制劑和離子門通道。大多數(shù)情況下，肽段的配體通過將固定的純化后的蛋白在噬菌體展示文庫里掃...
一、大約100年前，法國化學(xué)家維克多·格林尼亞發(fā)現(xiàn)，將一個(gè)鎂原子同一個(gè)碳原子偶聯(lián)在一起，會(huì)將額外的電子推向這個(gè)碳原子，使得它能夠更容易同另外一個(gè)碳原子連接在一起。不過，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，這樣的方法在創(chuàng)造簡(jiǎn)...
以中科院院士、上海交通大學(xué)*微生物代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室教授鄧子新的研究團(tuán)隊(duì)與中科院微生物研究所合作，近在多氧霉素（又名多抗霉素，寶麗安等）生物合成機(jī)理研究領(lǐng)域獲得突破，從多氧霉素生物合成全基因簇克隆并獲得3...
有多種不同的方法可使抗原有效地結(jié)合到免疫親和柱上。因?yàn)榭贵w是通過共價(jià)與微珠偶聯(lián)，而不是在溶液中，抗體—微珠／抗原作用完成所需的時(shí)間比抗體和抗原二者以游離狀態(tài)在溶液中所需的時(shí)間要長得多。因此，采用的方法...
特異性背景條帶的產(chǎn)生是由于多克隆抗體血清中的雜抗體或是待測(cè)抗原和樣品中其他成分，具有可被抗體識(shí)別的共同表位而產(chǎn)生的特異性交叉反應(yīng)。后者在使用單克隆抗體時(shí)較普遍。非特異性擴(kuò)散的背景主要是由于印跡膜封閉得...
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