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抗體實(shí)驗(yàn)原理分享2023/11/28
實(shí)驗(yàn)原理:1、特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、活補(bǔ)體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。3、結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答。4、可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫
小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作2023/11/20
小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作:1、復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的P
科研抗體實(shí)驗(yàn)原理介紹2023/11/13
實(shí)驗(yàn)原理:1、特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、活補(bǔ)體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。3、結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答。4、可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫
試驗(yàn)室中化學(xué)試劑正確保存的辦法2023/11/06
化學(xué)試劑既要保管好試劑不使蛻變或損耗,又要留意危險(xiǎn)性試劑的du害效果,防止火警、損害以及放射性污染等事端的發(fā)作。想要試驗(yàn)做的好,那么化學(xué)試劑一定要保存的好,萬一出現(xiàn)個什么不小心,那不便是浪費(fèi)了化學(xué)試劑,有耽誤了自己做試驗(yàn)的時刻,那么以下總結(jié)的試驗(yàn)室中化學(xué)試劑怎么正確保存的辦法。一、避光其實(shí)在試驗(yàn)室中許多化學(xué)試劑見強(qiáng)光都極易揮發(fā)蛻變,所以為避免試劑遭到光的輻射,應(yīng)選用棕色玻璃瓶,外用黑紙包裹,并儲藏于暗室或遮光的試劑柜中。避光保存適用于能進(jìn)行光化學(xué)反響的試劑,如胺類、酚類、醛類等。二、低溫為了使試
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)方法探討2023/10/30
根據(jù)所使用的技術(shù)不同,實(shí)時熒光定量PCR可以分為:熒光探針和熒光染料兩種方法。現(xiàn)將其原理簡述如下:1.TaqMan熒光探針TaqMan探針法是高度特異的定量PCR技術(shù),其核心是利用Taq酶的3'→5'外切核酸酶活性,切斷探針,產(chǎn)生熒光信號。PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報(bào)告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的3'→5'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光
ELISA檢測試劑盒操作過程注意事項(xiàng)2023/10/23
ELISA檢測試劑盒操作過程注意事項(xiàng):1加樣:①實(shí)驗(yàn)樣本過多時,可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時間延長造成的誤差;②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;③作定量試驗(yàn)時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。2.溫育:①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;②用1個小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水浴;3.洗板:①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不
渾濁紅球菌的培養(yǎng)2023/10/17
渾濁紅球菌的培養(yǎng):1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度
細(xì)胞傳代密度問題與解決方案2023/10/08
細(xì)胞傳代密度問題與解決方案:1.傳代密度過高一旦細(xì)胞養(yǎng)太久至融合度過高(90%)才傳代,容易使細(xì)胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細(xì)胞時不易吹打成單顆細(xì)胞,即便再重新鋪盤傳代,細(xì)胞也無法回到原本的特性了。(如:單層細(xì)胞,沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)解決方案:盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達(dá)到80%即可傳代分盤。細(xì)胞融合度:在細(xì)胞培養(yǎng)中指的是細(xì)胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。2.傳代密度過低哺乳動物貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,若細(xì)胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細(xì)胞密度過低,細(xì)胞間距離太遠(yuǎn)
?單克隆抗體與多克隆抗體對比2023/10/03
單克隆抗體(monoclonalantibody,mAb):就是指由單一B細(xì)胞(其基因僅能編碼一種抗體)克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。單克隆抗體是通過將抗原注入到宿主動物體內(nèi)啟動機(jī)體免疫應(yīng)答而產(chǎn)生的。因而制作單克隆抗體的大多數(shù)操作都是在體外將來自這些宿主的脾細(xì)胞與培養(yǎng)的惡性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。將du特的細(xì)胞克隆分離出來,融合步驟中存活下來的細(xì)胞稱為雜交瘤。雜交瘤因骨髓瘤特性而可以永生,且容易在培養(yǎng)物中繁殖。多克隆抗體:用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物,可刺激機(jī)體多個B細(xì)
實(shí)時熒光定量 PCR (RT-qPCR)實(shí)驗(yàn)之RNA提取2023/09/25
實(shí)時熒光定量PCR(RT-qPCR)實(shí)驗(yàn)過程中,RNA的提取是參照全式金生物的Transzolup提取試劑盒完成的。1、離心機(jī)4℃預(yù)冷,準(zhǔn)備試劑:氯仿、異內(nèi)醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管,戴口罩、帽子、無粉乳膠手套;2、取出轉(zhuǎn)染建模成功24h后的細(xì)胞,吸棄培養(yǎng)液,用1×PBS清洗1次;3、每10cm2生長的細(xì)胞加入1mL的TranszolUp,放置片刻后使用移液槍吹打細(xì)胞使其wan全脫落;4、用移液槍反復(fù)吹吸裂解液直至無明顯沉淀,將裂解液全部轉(zhuǎn)移
賴氨酸(Lys)含量測定試劑盒Lys含量計(jì)算2023/09/11
測定原理:蛋白質(zhì)中的賴氨酸(lysine,Lys)具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì),其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮an酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同,而且僅有—個游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮an酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。賴氨酸含量計(jì)算:a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下:標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y=0.0062x-0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。1.按照蛋白濃度計(jì)算賴氨酸含量(µg/mgprot)=[(△A+0.0212)÷0.
I型膠原單克隆抗體穩(wěn)定性良好原因2023/08/28
抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩(wěn)定性,主要原因有四個方面:1.抗體純度高純度的抗體產(chǎn)品,去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì),保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù),確??贵w產(chǎn)品的高純度,保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。2.抗體濃度高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失。撫生抗體產(chǎn)品中,93%的濃度大于0.5mg/ml??贵w產(chǎn)品濃度普遍大于業(yè)內(nèi)水平。3.抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進(jìn)化的結(jié)果抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化
ELISA的檢測收集標(biāo)本注意事項(xiàng)2023/08/21
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA的檢測目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù),為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制,在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計(jì)劃。注意事項(xiàng):1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類,如果要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測種類x22、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測可保存于2-8°C,若不及時
ELISA試驗(yàn)樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2023/08/17
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:ELISA進(jìn)口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。1、血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。3、尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集
配置常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑詳述2023/08/07
幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶ye等)。1、無鈣、鎂、離子溶液(1000ml)氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫na、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氫na(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL2、PBS(Phosphate-Bufferedsaline)磷酸鹽緩沖液甲液:0.2mol/L磷酸氫二na溶液、磷酸氫二na(無水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL乙液:0.2mo
生化液體型試劑解析2023/08/01
無論是單試劑還是雙試劑型試劑,目前乃至今后仍以液體型為主要劑型。其優(yōu)點(diǎn)是液體型試劑的試劑組分高度均一,瓶間差異小,測定重復(fù)性好而且使用方便;它也無需加入輔助試劑及蒸餾水,防止了外源性水質(zhì)對試劑的影響,性能較穩(wěn)定,測定結(jié)果比較準(zhǔn)確。缺點(diǎn)是液體型試劑(尤其是酶試劑)保存時間較短,不便于運(yùn)輸。1.液體單試劑所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗(yàn)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)地混合在一起,組成為一種試劑。應(yīng)用時,只須將標(biāo)本和試劑按比例混合,即可進(jìn)行相應(yīng)的生化反應(yīng),然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測結(jié)果。應(yīng)用十分方便。2.液體雙試劑所
PCR對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果好,目的片段不理想分析2023/07/17
對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果好,卻沒有回收到目的片段,實(shí)驗(yàn)出了什么問題?參考見解:1連接用室溫保溫1小時,能滿足大多數(shù)克隆,為提高效率,需4oC過夜。2插入片段帶有污染,使3`-T缺失,或抑制連接,抑制轉(zhuǎn)化。為此,將插入片段和pGEM-T正對照混合,再連接。如降低了對照的菌落數(shù),插入片段需純化,或重新制備。如產(chǎn)生大量的藍(lán)斑,插入片段污染有核酸酶,使pGEM-T或pGEM-TEasy載體3`-T缺失。3插入片段不適于連接。用凝膠純化的插入片段,因受UV過度照射,時有發(fā)生。UV過度照射會產(chǎn)生嘧啶二聚體,不利于連接,
?菌種的培養(yǎng)分析2023/07/10
菌種的培養(yǎng):1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備,其中(1)~(4)為孢子制備過程。4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊
ELISA試劑盒特異性影響因素2023/06/26
ELISA試劑盒特異性影響因素:1、固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板最為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進(jìn)行認(rèn)證,評估。2、包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%
PCR反應(yīng)靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染解答2023/06/12
PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽性,一是引物設(shè)計(jì)不合適:選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性,因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時,擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計(jì)引物。二是靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染:這種污染有兩種原因:1、整個基因組或大片段的交叉污染,導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:1)、操作時應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內(nèi)或?yàn)R出離心管外。2)、除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及進(jìn)樣槍頭均應(yīng)一次性使用。3)、必要時,
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