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細(xì)胞傳代密度問(wèn)題與解決方案:
1.傳代密度過(guò)高
一旦細(xì)胞養(yǎng)太久至融合度過(guò)高(>90%)才傳代,容易使細(xì)胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細(xì)胞時(shí)不易吹打成單顆細(xì)胞,即便再重新鋪盤(pán)傳代,細(xì)胞也無(wú)法回到原本的特性了。(如:?jiǎn)螌蛹?xì)胞,沒(méi)長(zhǎng)滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)
解決方案:
盡量避免融合度過(guò)高,鏡下觀察融合度約達(dá)到80%即可傳代分盤(pán)。
細(xì)胞融合度:在細(xì)胞培養(yǎng)中指的是細(xì)胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。
2.傳代密度過(guò)低
哺乳動(dòng)物貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,若細(xì)胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開(kāi)始傳代,在傳代接種細(xì)胞密度過(guò)低,細(xì)胞間距離太遠(yuǎn),就無(wú)法在細(xì)胞間產(chǎn)生黏附及通信作用,幫助信號(hào)傳導(dǎo)并活化細(xì)胞;總體細(xì)胞量不足,分泌的生長(zhǎng)因子濃度會(huì)不足以產(chǎn)生利于生長(zhǎng)的微環(huán)境,以上皆會(huì)造成增殖速度遲緩或細(xì)胞死亡。
解決方案:
細(xì)胞傳代時(shí),要進(jìn)行準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù),確保鋪盤(pán)的密度。
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