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ELISA實(shí)驗(yàn)CV值高分析2024/09/24: 免疫檢測(cè)法的精確性表現(xiàn)為單次實(shí)驗(yàn)孔間（批內(nèi)）的重復(fù)性和多次實(shí)驗(yàn)之間（批間）的重復(fù)性。CV值高則表明精確度低，通常由以下兩個(gè)原因造成：移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。一、移液技術(shù)1.移液時(shí)，槍頭應(yīng)對(duì)準(zhǔn)孔，避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性，請(qǐng)預(yù)先潤(rùn)洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均，說(shuō)明移液器需要校正。必要時(shí)請(qǐng)檢查移液器并重新校正。5.加樣時(shí)，不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭，避免交叉污染。6.確保使用合適的

細(xì)胞凍存操作過(guò)程注意事項(xiàng)2024/09/18: 細(xì)胞凍存操作過(guò)程注意事項(xiàng)：1.為保持細(xì)胞最大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當(dāng)溫度下降達(dá)－25℃時(shí)，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時(shí)則可迅速凍入液氮中。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時(shí)，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測(cè)液面位置，然后需用溫度計(jì)與凍存物并行的辦法，以觀測(cè)下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)2024/09/09: 小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1、收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。2、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。3、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4

細(xì)胞因子的各種類介紹2024/09/02: 細(xì)胞因子是由免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞合成并分泌的具有廣泛生物學(xué)活性的低分子質(zhì)量蛋白或多肽，參與細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)和相互作用。細(xì)胞因子的種類：1、白細(xì)胞介素（IL）IL是一類能夠雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子家族，主要參與免疫細(xì)胞的分化和激活。最初，IL泛指由白細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，在細(xì)胞間發(fā)揮作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL是由多種細(xì)胞類型產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。IL可劃分為IL-1細(xì)胞因子家族、共同γ鏈細(xì)胞因子家族、IL-10細(xì)胞因子家族、IL-12細(xì)胞因子家族等。目前至少發(fā)現(xiàn)了40種IL

熒光定量PCR儀選擇關(guān)注點(diǎn)匯總2024/08/26: 選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時(shí)關(guān)注點(diǎn):1、儀器的檢測(cè)通量在購(gòu)買定量PCR儀的時(shí)候要根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)的需要來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測(cè)通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測(cè)，實(shí)在不必購(gòu)買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室可以考慮購(gòu)買384孔板的儀器。假如經(jīng)費(fèi)有限無(wú)法購(gòu)買384孔板儀器的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮購(gòu)買運(yùn)行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、

PCR反應(yīng)假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶分析2024/08/19: PCR反應(yīng)常出現(xiàn)假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶現(xiàn)象，PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時(shí)丟失過(guò)多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹di。在酶和引物質(zhì)量好時(shí)，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過(guò)程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應(yīng)固定不宜隨意更改。酶失活：

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）操作步驟2024/08/05: 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一。操作步驟：1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。10×PCRbuffer5μldNTPmix（2mM）4μl引物1（10pM）2μl引物2（10pM）2μlTaq酶（2U/μl）1μlDNA模板（50ng-1μg/μl）1μl加ddH2O至50μl視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置P

omentin大鼠網(wǎng)膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟2024/07/30: omentin大鼠網(wǎng)膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟：①：抗體包被在96孔板上包被抗體。由于酶標(biāo)板是由聚苯乙烯制成，其含有的苯環(huán)與抗體的氨基酸殘基具有類似π-π堆積作用的引力，結(jié)合靜電和疏水作用，可以將抗體吸附于其表面。然后，將未吸附的抗體用緩沖液清洗后，加入含有明膠或牛血清蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）的封閉液以封閉酶標(biāo)板上未結(jié)合抗體的部分。加入封閉液的目的，是防止其他蛋白因靜電或疏水作用吸附在96孔板上，造成假陽(yáng)性信號(hào)，干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。②：免疫識(shí)別在96孔板

PCR“平臺(tái)效應(yīng)”相關(guān)因素介紹2024/07/22: “平臺(tái)效應(yīng)”是指PCR后期循環(huán)產(chǎn)物累積趨于飽和，使原來(lái)以指數(shù)增長(zhǎng)的速率變成平坦的曲線，同時(shí)出現(xiàn)非特異產(chǎn)物的大量增加的現(xiàn)象。下列因素可能與平臺(tái)效應(yīng)有關(guān)：（1）dNTP或引物的消耗量。（2）反應(yīng)物的穩(wěn)定度（dNTP或酶）（3）最終產(chǎn)物的阻化作用（焦磷酸鹽、雙鏈DNA）。（4）非特異產(chǎn)物或引物二聚體與反應(yīng)物的競(jìng)爭(zhēng)。（5）產(chǎn)物在高濃度時(shí)變性不全，影響引物的延伸。（6）酶與PCR產(chǎn)物的結(jié)合，使酶分子減少。合理的PCR循環(huán)參數(shù)，能最大限度地避免這些因素對(duì)產(chǎn)物擴(kuò)增的影響。

細(xì)胞收到處理流程2024/07/08: 細(xì)胞收到處理流程：1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)

培養(yǎng)基（Medium）常見的滅菌方法2024/07/01: 培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及生長(zhǎng)素和水等。在發(fā)酵過(guò)程中，培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個(gè)原因：如不滅菌，會(huì)使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物，因雜菌的消耗而損失，造成生產(chǎn)能力的下降;雜菌也會(huì)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，這就使產(chǎn)物的提取更加困難，造成得率降低，產(chǎn)品質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后，會(huì)改變反應(yīng)液的pH值，使反應(yīng)異常;有些雜菌會(huì)分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗;如果發(fā)生噬菌體污染，生產(chǎn)菌細(xì)胞將被裂解，使生產(chǎn)失敗。常見的滅菌方法：1、

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用途有哪些2024/06/24: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的幾個(gè)方面用途：1、用作校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)一是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定儀器的計(jì)量性能是否合格，如響應(yīng)曲線、精密度、靈敏度、檢測(cè)限與穩(wěn)定性等，可選用與儀器測(cè)量范圍相宜、量值成梯度的系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，從量值最小的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開始，逐個(gè)測(cè)定。二是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做校準(zhǔn)曲線，為實(shí)際樣品建立定量關(guān)系，此時(shí)應(yīng)選擇與被測(cè)樣品基體相匹配的系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用與測(cè)定樣品相同的方法和測(cè)量條件，逐個(gè)測(cè)定。以上兩種情況的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)處理均基于最小二乘法線性回歸原理。2、用作工作標(biāo)準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做測(cè)量工作標(biāo)準(zhǔn)，給物質(zhì)或材料賦值。應(yīng)選用一種基體與量值均

各種類血清不同點(diǎn)區(qū)別2024/06/18: 血清（serum）是指在凝固后，將紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板等細(xì)胞成分除去后所剩下的液體部分。它由水、蛋白質(zhì)、糖類、激素、酶、電解質(zhì)和其他生物分子組成。血清可以通過(guò)離心或其他方法從全血中分離出來(lái)，并可用于研究許多方面的生物學(xué)過(guò)程。1.血清分類：血清有以下常見四種類別，它們的胎齡：胎牛血清（FBS)胎兒(母牛懷孕3-8個(gè)月)新生牛血清(NCS)出生10日內(nèi)小牛血清（BCS）16-22周供體血清成年牛2.采血方式不同胎牛血清：母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí)，采用剖腹心臟密閉穿刺取血新生牛血清、小牛血清、供體牛血清

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求2024/06/12: 血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、

凍存細(xì)胞收集處理過(guò)程2024/06/03: 凍存細(xì)胞是通過(guò)冷凍保護(hù)機(jī)制將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，保持細(xì)胞活性，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞復(fù)蘇后，蛋白質(zhì)仍有活性，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能仍完好。下面收到凍存細(xì)胞收集處理過(guò)程：1、收到快遞后，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無(wú)干冰，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系供貨商。2、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快復(fù)蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時(shí)需提供。3、復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴

PCR產(chǎn)物純化效率提升要點(diǎn)匯總2024/05/27: PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下，可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率要點(diǎn)匯總?cè)缦拢?.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí)，會(huì)一定程度影響pcr效率；2.模板量，過(guò)高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性；3.引物，引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；5.mg離子濃度，mg離子濃度過(guò)高會(huì)降低特異性，濃度過(guò)低會(huì)降低效率；6.退火溫度：退火溫度低，效率會(huì)高，但特異性降低；退火溫度高，效率降低

二抗的選擇指導(dǎo)2024/05/20: 二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。二抗，廣義上是指專門和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一

細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)步驟2024/05/13: 細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理：當(dāng)待測(cè)細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí)，通過(guò)測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。實(shí)驗(yàn)步驟：一.準(zhǔn)備工作：取一瓶傳代的細(xì)胞，按照《傳代細(xì)胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細(xì)胞，待長(zhǎng)成單層后以被使用。二.細(xì)胞懸液制備：細(xì)胞懸液的制備方法是用0.25％的yi蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶yi），吹打制成待測(cè)細(xì)胞懸液。三.細(xì)胞計(jì)數(shù)：1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。2.制備計(jì)數(shù)用的

ELISA試劑盒結(jié)果處理報(bào)告2024/05/06: ELISA試劑盒結(jié)果處理報(bào)告：1、結(jié)果的判定嚴(yán)格依據(jù)試劑盒提供的陽(yáng)性判定值（CO）進(jìn)行結(jié)果判定。提供試劑的同時(shí)，說(shuō)明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測(cè)定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報(bào)告方式為“陰性"或“陽(yáng)性"，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽(yáng)性判定值即CO值，對(duì)于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽(yáng)性，相反則判斷為陰性，然而在實(shí)際工作中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近的人群，即ELISA

選擇適合實(shí)驗(yàn)需要的抗體要點(diǎn)2024/04/28: 選擇適合實(shí)驗(yàn)需要的抗體要點(diǎn)：1.一抗選擇要點(diǎn)（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。（2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說(shuō)明書都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說(shuō)明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書列出的已驗(yàn)證的類型來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。（3）確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說(shuō)明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于

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