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分享ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)2024/04/22: ELISA實(shí)驗(yàn)有四種常用的檢測(cè)方法，分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法?，F(xiàn)分享下它們的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。1.直接法（directELISA）將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。缺點(diǎn)：試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費(fèi)用相對(duì)提高。2.間接法（indirectELISA）此測(cè)定方法與直接法類似，差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量

血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有什么2024/04/15: 血清的種類：現(xiàn)常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質(zhì)高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):1.內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。2.總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行。3.血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl。4.pH。國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5，進(jìn)口

基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體制備過(guò)程2024/04/08: 基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體制備過(guò)程：1.免疫原：普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜

H9細(xì)胞消化液操作說(shuō)明2024/03/29: 操作說(shuō)明：1.將H9全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過(guò)Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養(yǎng)基，置于5%CO2的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。2.吸走待傳代細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS全培養(yǎng)基，并且加入無(wú)鈣鎂的PBS溶液洗一次。3.加入0.5mMEDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。4.室溫放置5~8min或37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育3~5min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細(xì)胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細(xì)胞消化時(shí)間理

影響鹽析的因素分析2024/03/25: 一般來(lái)說(shuō)，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過(guò)程叫鹽析。影響鹽析的若干因素:1．蛋白質(zhì)濃度高濃度蛋白溶液可以節(jié)約鹽的用量，但許多蛋白質(zhì)的b和Ks常數(shù)十分接近，若蛋白濃度過(guò)高，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的共沉淀作用；在低濃度蛋白質(zhì)溶液中鹽析，所用的鹽量較多，而共沉淀作用比較少，因此需要在兩者之間進(jìn)行適當(dāng)選擇。用于分步分離提純時(shí)，寧可選擇稀一些的蛋白質(zhì)溶液，多加一點(diǎn)中性鹽，使共沉淀作用減至低限度。一般認(rèn)為2.5%-3.0%的蛋白質(zhì)濃度比較適中。2．離子強(qiáng)度和類型一般說(shuō)來(lái)，離子強(qiáng)度越大，蛋白質(zhì)的溶解

ELISA試劑盒標(biāo)本保存注意事項(xiàng)2024/03/18: ELISA試劑盒標(biāo)本保存注意事項(xiàng)：1、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA試劑盒如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)期保存，應(yīng)在-70℃以下。2、冰凍保存的血清標(biāo)本須留心避免因停電等構(gòu)成的重復(fù)凍融。ELISA試劑盒標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性效果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留心，不要進(jìn)行劇烈振動(dòng)，重復(fù)倒置混勻即可。3、要留心避免呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過(guò)氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)

PCR反應(yīng)假陽(yáng)性結(jié)果產(chǎn)生原因及解決方法2024/03/11: 假陽(yáng)性是指出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時(shí)其條帶更整齊，亮度更高。產(chǎn)生的原因有：①引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的序列；②靶序列太短或引物太短；③靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。解決方法有：操作輕柔，防止靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外造成污染；除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材高壓消毒；離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時(shí)，可在加標(biāo)本前，將反應(yīng)管和試劑用紫外光照射，以破壞存在的核酸。

PCR反應(yīng)三步循環(huán)播放過(guò)程介紹2024/03/04: PCR過(guò)程分三步：變性--退火--延伸，PCR中會(huì)對(duì)這三步循環(huán)播放。1.變性在開(kāi)始準(zhǔn)備變性的過(guò)程中，要慢慢加熱混合物，加熱混合物時(shí)，兩條鏈間氫鍵會(huì)融化，DNA兩股鏈會(huì)分開(kāi)，就像上圖粉色的部分。如果混合物熱的情況下，引物不會(huì)和DNA黏在一起，兩條DNA鏈也不會(huì)黏在一起。2.退火接下來(lái)混合物慢慢的冷卻，這時(shí)引物會(huì)黏在DNA上，因?yàn)橐镙^小，更容易漂浮起來(lái)，和DNA結(jié)合。溫度控制在54攝氏度左右可以保證引物序列和DNA互補(bǔ)配對(duì)，而DNA雙鏈不會(huì)黏在一起。3.延伸這一步我們需要一個(gè)幫助DNA復(fù)制的工具，

大鼠elisa分析檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制2024/02/26: ELISA利用抗原抗體之間專一性結(jié)合之特性，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)；由于結(jié)合與固體承載物（一般為塑膠孔盤(pán)）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設(shè)計(jì)其結(jié)合機(jī)制後，配合酵素顯色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進(jìn)行定量分析。確保ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)成功的七個(gè)環(huán)境因素：1.為推遲光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽(yáng)光直射。2.操作環(huán)境溫度應(yīng)在15℃至40℃之間，環(huán)境濕度在15%~85%之間。3.儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。4.操作時(shí)電壓應(yīng)堅(jiān)持穩(wěn)定。5.操作環(huán)境空氣清洗，避免水汽、煙塵。6.

培養(yǎng)基的購(gòu)置與驗(yàn)收介紹2024/02/18: 培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。下面介紹培養(yǎng)基的購(gòu)置與驗(yàn)收：1.購(gòu)置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來(lái)看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號(hào)的產(chǎn)品都會(huì)存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，對(duì)培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評(píng)價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商，這是培養(yǎng)基購(gòu)買過(guò)程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過(guò)了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱及

?細(xì)胞培養(yǎng)步驟2024/02/05: 細(xì)胞培養(yǎng)步驟：一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：1）準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO31.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。二．細(xì)胞處理：1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在100

動(dòng)物血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用2024/01/29: 細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必須的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。培養(yǎng)細(xì)胞用的培養(yǎng)基為人工合成，但動(dòng)物細(xì)胞生活的內(nèi)環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，加入動(dòng)物血清是為了給體外培養(yǎng)的細(xì)胞提供一個(gè)類似生物體內(nèi)的環(huán)境，此外動(dòng)物血清中也包含了一些動(dòng)物的激素和酶,可以促進(jìn)細(xì)胞的發(fā)育。主要作用有：(1)提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞

RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶的三種活性介紹2024/01/22: 逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于RNA病毒體內(nèi)的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性：1.依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈；2.Rnase水解活性：水解Rnase雜合體中的RNA;3.依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈DNA在選擇逆轉(zhuǎn)錄酶時(shí)，建議選擇無(wú)RNaseH①活性（RNaseH-）的逆轉(zhuǎn)錄酶。具有RNaseH活性的逆轉(zhuǎn)錄酶的RNaseH活性會(huì)與聚合酶活性競(jìng)爭(zhēng)RNA模板與DNA引物（或cDNA延伸鏈）形成的

小鼠脂蛋白α（Lp-α）elisa檢測(cè)試劑盒?操作要點(diǎn)2024/01/15: 小鼠脂蛋白α（Lp-α）elisa檢測(cè)試劑盒操作要點(diǎn):1、標(biāo)本的采取和保存：可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本；2、試劑的準(zhǔn)備：所需試劑、蒸餾水、去離子水、自配的緩沖液；3、加樣：一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。4、保溫：ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加

培養(yǎng)基的性能檢測(cè)要點(diǎn)2024/01/08: 培養(yǎng)基的性能測(cè)試1.外觀控制制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水。2.污染控制從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(無(wú)菌試驗(yàn))，確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。3.性能測(cè)試(1)測(cè)試菌株選擇測(cè)試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應(yīng)來(lái)自國(guó)際/菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。(2)定量測(cè)試方法（改良Mi

大鼠血管粘附蛋白1（VAP-1）elisa定量檢測(cè)試劑盒變質(zhì)詳細(xì)分析2024/01/02: ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見(jiàn)的問(wèn)題，影響ELISA試劑盒變質(zhì)詳細(xì)分析如下幾點(diǎn)：1、方法學(xué)的影響ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。2、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行

PCR反應(yīng)污染詮釋2023/12/25: PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染，這是PCR反應(yīng)中最主要最常見(jiàn)的污染問(wèn)題，所以，擴(kuò)增區(qū)的儀器什么如槍頭等要注意。還有一種容易忽視，最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染.據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆?？珊?8000拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。1.標(biāo)本處理區(qū)，包括擴(kuò)增摸板的制備；2.PCR擴(kuò)增區(qū)，包括反應(yīng)液的配制和PCR擴(kuò)增；3.產(chǎn)物分析區(qū)，凝膠電泳分析，產(chǎn)物拍照及重組克隆

髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體實(shí)驗(yàn)原理2023/12/18: 髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體實(shí)驗(yàn)原理:1、特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷。然而，抗體可通過(guò)與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、活補(bǔ)體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過(guò)經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過(guò)替代途徑激活補(bǔ)體。3、結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答。4、可通過(guò)胎盤(pán)及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血流中

血小板反應(yīng)蛋白抗體操作步驟2023/12/11: 操作步驟:1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡15分鐘,重復(fù)三次。去除多余的液體后,依次置于無(wú)水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡5分鐘,蒸餾水(或自來(lái)水)沖洗5分鐘。用PBS緩沖液(試劑1,將干粉溶解于1L去離子水中)沖洗切片5分鐘,重復(fù)三次。2.抗原修復(fù)。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯(或修復(fù)盒)中的耐高溫塑料切片架上,加適量修復(fù)液1×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(試劑2,將100×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液加去離子水稀釋成1×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液),液面要浸過(guò)切片組織一定高

轉(zhuǎn)染三類途徑簡(jiǎn)介2023/12/04: 轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類：1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。2.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。3.生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是，病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，

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