亞硝酰氫(HNO)檢測試劑盒200T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
亞硝酰氫(HNO)檢測試劑盒200T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
LTBR Others Cynomolgus 食蟹猴 LTBR / TNFRSF3 人細胞裂解液 (陽性對照)
U937細胞,人組織細胞淋巴瘤細胞 小鼠骨髓瘤細胞,NS1細胞 人表皮黑色素細胞-淺色素cDNAHEM-l cDNA
中國倉鼠卵巢細胞;CHO
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細胞亞株) 5×106cells/瓶×2 CL-0150MDA-MB-231(人癌細胞)5×106cells/瓶×2 Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256
兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人細胞裂解液 (陽性對照)
氣管平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
Y2細胞,小鼠成纖維細胞 人卵巢癌*耐藥株,COC1/CDDP細胞 人食道上皮細胞裂解物HEEpiCL
非洲綠猴腎細胞;CV-1
IGFBP3 Others Human 人 IGFBP3 / IBP3 人細胞裂解液 (陽性對照)
ACE2 Others Rat 大鼠 ACE2 / ACEH 人細胞裂解液 (陽性對照)
人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2
NCI-H661 人大細胞肺癌細胞
mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞
人間充質(zhì)干細胞-脂肪
人胚肺成纖維細胞;IMR-90 人淋巴血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)免疫試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit
血糖含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISA試劑盒大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析體(sEPCR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humaninterleukinreceptorassociatedkinase,IRAKELISA試劑盒人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMyoglobin,MYO/MBELISAKit人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子*(cAMP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thymus peptide five (TP-5) ELISA Kit 人*(TP-5)ELISA試劑盒
Humananti-nuclearfactorAntibody,ANFELISAKit 人抗核因子抗體(ANF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember12,EAR12ELISA試劑盒人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織PKG-II激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
亞硝酰氫(HNO)檢測試劑盒200T實驗方法人白細胞分化抗原14(CDl4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白細胞調(diào)節(jié)素(LR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白細胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白色念珠菌抗體(C.albicansab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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