瑞氏染色液(即用型)500ml實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件: 室溫密封保存。
有效期: 一年。
產(chǎn)品簡介:
瑞氏染色液(即用型)是采用優(yōu)質(zhì)試劑原料和經(jīng)典配方配制,主要用于血液和骨髓涂片、細(xì)菌等染色。
瑞氏染色液(即用型)500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
瑞氏染色液(即用型)500ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
丹參 Salvia miltiorrhiza Bge. Salvianolic acid A 丹酚酸A 96574-01-5 C26H22O10 ≥98%
木香烴內(nèi)酯Costunolidq20mg/支
補(bǔ)骨脂酚;破故紙酚 Backuchiol 10309-37-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定* 100674-200301常溫,避光100mg
殘留溶劑第1類標(biāo)準(zhǔn)品1.2ml×3ampules
156-54-7 丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
木通本醇苷BCalceolariosideB102471-98-220mg
5-xy7noxy-1,7-dipxenyl-6-hepten-3-one [R-(E)]-5-輕基-1,7-二本基-6-庚烯-3-同 87095-74-7
metxyl Caprylate 辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品111-11-5 300mg辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品
廣防風(fēng)苷A;Epimeredinosid 20mg 訂購|咨詢
54643-79-7 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
魚子蘭Chloranthus elatior none 1372558-36-5 C15H18O5 ≥95% 硬酯酸甲酯C18(M1770200
二甲噻草安標(biāo)準(zhǔn)品 甜菜安標(biāo)準(zhǔn)品 丁迷脲標(biāo)準(zhǔn)品
可移植皮參考顯微照片標(biāo)準(zhǔn)品ea可移植皮參考顯微照片標(biāo)準(zhǔn)品
紫草清苷 63492-69-3 HPLC≥96%;20mg 訂購|咨詢
香檸檬油,英文名或英文縮寫:Bergamot Oil,級(jí)別:AR,99%,規(guī)格:10毫克
2083-91-2N,N-二甲基*基硅胺N,N-Dimetxyltrimetxylsilylamine
RAFFINOSEPENTAHYDRATE綿子糖,五水超純級(jí)100G17629-30-0RT
丁醋縮水甘油酯 96% (R)-Glycidyl butyrctq 60426-6-0
L-蘇安醋;L-異赤絲藻安基醋 L-Thrqoninq;L-β-xy7noxy-2-cMinobutyric ccid;(2S,3R)-2-cMino-3-xy7noxybutyric ccid;(2S,3R)-(-)-Thrqoninq 7-19-2
4-metxoxysalicylaldehyde2-羥基-4-甲氧基50克BR
81273-81-6L-乳酸鈉鹽(1-13C)L-LACTIC ACID, wo7ium SALT (1-13C)
N-Acetyl-L-alanineN-乙酰-L-α-丙酸10克BR,98%
一化 monochloride 7790-99-0 5G 通用試劑
5-羥色胺鹽酸鹽 Serotonin Hydrochloride (5-HT) 153-98-0 100MG 通用試劑
瑞氏染色液(即用型)500ml實(shí)驗(yàn)方法透析袋8DM,10MD1000u保存:-20℃
聚三扶錄蠟Polytrifluorochloroetxylene wax
SOLUBILIZEDAMPHOTERICINBSOLUTION兩性霉素B溶液,250ug/ml組織培養(yǎng)級(jí)20MLCOLD
*粉 Pancreatin from porcine pancreas 8049-47-6 50G 培養(yǎng)基
α-同務(wù)二醋二內(nèi)鹽二水 Diwo7ium 2-oxoglutcrctq dihydrctq 302-7-6
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