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細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書

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細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T

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細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書 產(chǎn)品詳情

細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
PC-3M(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC tRNA

REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

MDA-MB-435S細(xì)胞,人癌細(xì)胞 鼠成纖維細(xì)胞系,GR細(xì)胞 原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml

CL-0318B16-F1(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HCAEC Pellet 人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 口腔角質(zhì)細(xì)胞生長添加物OKGS
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP

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R 1610(倉鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ES-2(人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0263BGC-803(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 貓腎細(xì)胞;F81
F13B Others Human F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

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CL-0426RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人星形膠質(zhì)細(xì)胞

人胚肺二倍體細(xì)胞;HL 人小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
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