細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
PC-3M(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC tRNA
REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MDA-MB-435S細(xì)胞,人癌細(xì)胞 鼠成纖維細(xì)胞系,GR細(xì)胞 原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml
CL-0318B16-F1(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HCAEC Pellet 人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 口腔角質(zhì)細(xì)胞生長添加物OKGS
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP
GP1BB Others Rat 大鼠 GP1BB / CD42c 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
原代骨細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
ECV-304細(xì)胞,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌) 人真皮成纖維細(xì)胞-總RNAHDF-a tRNA
R 1610(倉鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
ES-2(人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0263BGC-803(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 貓腎細(xì)胞;F81
F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人淋巴成纖維細(xì)胞RNAHLF miRNA5 μg
U251 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
CL-0426RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人星形膠質(zhì)細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞;HL 人小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠血沉(ESR)elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒 Human ICAM-2 ELISA Kit
基酸(AA)含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
Ratoxidizedlowdensitylipoproteinantibody,OLAbELISA試劑盒大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanhypoxia-induciblefactor1α,HIF-1αELISA試劑盒人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMatrixGlaProtein,MGPELISAKit人基質(zhì)γ羧基*蛋白(MGP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human gastrin cell antibody (GCA) ELISA Kit 人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒
PorcinePrednisoloneELISAKit 豬*龍(Prednisolone)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCpGoligodeoxynucleotide,CpG-ODNELISA試劑盒人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織COT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanProteinCarbonyl,PCELISAKit人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)胞脂質(zhì)染色試劑盒1000T使用說明書人抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗類固醇細(xì)胞抗體(SCA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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