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ATP含量HPLC法檢測(cè)試劑盒

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)48T/96T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-04-27 09:25:00瀏覽次數(shù):174次

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貨號(hào) GOY-01S6550
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28.png

商品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

ATP含量HPLC法檢測(cè)試劑盒

規(guī)格

50管/48樣

檢測(cè)方法

HPLC法

貨號(hào)

GOY-01S6550

商品介紹:

測(cè)定意義

ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。

測(cè)定原理:

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量,以此反應(yīng)ATP含量。

自備儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

L-纈甲酯鹽酸鹽 99%斯皮諾素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%Anti-MDM2  雙微體2癌基因抗體

環(huán)烷羧酸 98%水飛薊寧 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% Anti-Phospho-MDM2 (Ser166)  化雙微體2癌基因抗體

吡咯烷 99%水飛薊亭 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% Anti-MDR1/p-GP/CD243  多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體

1-四氫萘酮 97% 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-MEF2A  肌增強(qiáng)因子2抗體

鎢酸銨 99.99% (metals basis)茵芋苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Phospho-MEF2A (Thr312)  化肌增強(qiáng)因子2抗體

鎢酸銨 AR,99%知母皂苷元 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% Anti-Phospho-MEF2A (Ser408)  化肌增強(qiáng)因子2抗體

仲鎢酸銨 99.95 %千金藤堿  分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Megsin  蛋白抑制劑B7抗體

鉬酸銨,四水 AR五味子素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Melamine  三聚抗體

ATP含量HPLC法檢測(cè)試劑盒聚烯酰 非離子型,分子量:200萬(wàn)-1400萬(wàn)絲氨蛋白/線粒體絲氨蛋白多肽抗原

N-鄰 99%離子鈣接頭蛋白抗原

蘿卜硫素 90%小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗原

異龍腦酯 95%干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗原

亞鈉 80%干擾素-α抗原(人)

N,N-二乙-2--1,4- 99%干擾素-gamma受體1抗原

超細(xì)球形銅粉 99.9%,D50(0.2~0.55μm) 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(多肽)

2,4-二-3,5-二硝三氟 97%胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3抗原

2,4,5-三嘧 98%胰島素樣生長(zhǎng)因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗原

2-酰酯 98%KB抑制蛋白β(多肽)

氨乙縮二 97%KB抑制蛋白α抗原

4-乙烯  98% 白介素12抗原(白介素-12)

納米氮化鋁 99.9% metals basis,50nm白介素12抗原(人)

六方氮化 99.9% metals basis,1~2μm白介素-12受體β2抗原

碳化 1-10 μm,98%白介素13抗原

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

 


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