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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化磷酸化系列>> Ca++Mg++ ——ATP酶微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6555 |
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6555 |
商品介紹
測(cè)定意義 Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中,可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。 測(cè)定原理: 根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性高低。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。
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Ca++Mg++ ——ATP酶微量法檢測(cè)試劑盒二硅油DC-200 GC,粘度~350 mPa.s, neat(25 °C)Anti-PDGF-R-B/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬VI型膠原α3(COL6α3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)/FITC 熒光素標(biāo)記化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬5核苷(5-NT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~20 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009) /FITC 熒光素標(biāo)記化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬纖蛋白原(FG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~50 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)/FITC 熒光素標(biāo)記化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬巨噬炎性蛋白5(MIP-5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~100 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740) /FITC 熒光素標(biāo)記化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬血小板球蛋白β(βTG/PBP/CXCL7/NAP2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~200 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)/FITC 熒光素標(biāo)記化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgG豬脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(FABP4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~500 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Paxillin/FITC 熒光素標(biāo)記樁蛋白Paxillin抗體IgG豬蛋白激C-θ(PKCθ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~1000 mPa.s, neat(25 °C)Anti-Phospho-Paxillin (Tyr118)/FITC 熒光素標(biāo)記化樁蛋白Paxillin抗體IgG豬破骨相關(guān)受體(OSCAR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)anti-PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)抗體IgG豬碳酐IV(CA4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
壬酚聚氧乙烯 Type NP-7Anti-PDK1/PDPK1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠3肌依賴(lài)性蛋白激1抗體IgG豬腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
壬酚聚氧乙烯 Type NP-9Anti-PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化3肌依賴(lài)性蛋白激1抗體IgG豬神經(jīng)肽Y受體Y1(NPYR1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
壬酚聚氧乙烯 Type NP-10Anti-Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光素標(biāo)記化3肌依賴(lài)性蛋白激1抗體IgG豬糖脂轉(zhuǎn)移蛋白(GLTP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3--4-氟 99%Anti-Pdk4/FITC 熒光素標(biāo)記酮脫氫激4抗體IgG豬色素P450家族成員1B1(CYP1B1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,3-二氧 99%Anti-Pdx1/FITC 熒光素標(biāo)記胰十二指腸同源異型盒因抗體IgG豬膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 )聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
對(duì)羥酯鈉 USP,Ph EurAnti-PEA3/FITC 熒光素標(biāo)記多瘤促活化因子抗體IgG豬卵泡抑素(FST)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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