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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 轉(zhuǎn)氫酶1微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6565 |
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測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6565 |
商品介紹
測(cè)定意義 TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。 測(cè)定原理: NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測(cè)定375nm光吸收的增加速率,來(lái)計(jì)算TH-2活性。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
甲基異丁酮 CP,98.0%氧化鏑 40nm 球形,99.5%Anti-KLF6/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體IgG
正 AR,99.0% 氧化鏑 ≥99.9% metals basisAnti-KLF8/FITC 熒光素標(biāo)記KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體IgG
四 AR,99.0%金屬鏑 99.9% (REO)Anti-KLF9/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體IgG
4-溴-2-氟苯甲 98%氟化鏑 99.99% metals basisAnti-KLF13/RFLAT-1 /FITC 熒光素標(biāo)記腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子13抗體IgG
1-溴-2-氟-4-苯 97%溴化鏑(III) 無(wú)水, 粉末, 99.99% metals basisAnti-KLK1/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放1抗體IgG
2,5-二氯苯甲 98%化鏑(III) 無(wú)水, 鱗片, 99.99% metals basisAnti-KLK3/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放3/3抗體IgG
3-氟苯 98%鏑(III),八水 99.9%Anti-KLK4/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放4抗體IgG
L-天冬酰 一水合物 99%鏑(III) 99.99% metals basisAnti-KLK7/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放7抗體IgG
轉(zhuǎn)氫酶1微量法檢測(cè)試劑盒位庚內(nèi)酯 Standard for GC ,>98.5% (GC)PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM
椰子 98%PE-Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgM
椰子 98%, FCC, KosherPE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgM
丁位壬內(nèi)酯 98%PE-Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgG
丁位壬內(nèi)酯 98%, FCC, KosherCy5標(biāo)記的羊抗人IgM
位辛內(nèi)酯 99%FITC標(biāo)記的羊抗人IgM
位辛內(nèi)酯 98%, FCC,KosherFITC標(biāo)記的羊抗人IgG
丁位辛內(nèi)酯 98%膠體金標(biāo)記的羊抗人IgG
丁位十一內(nèi)酯 98%FITC標(biāo)記的兔抗人IgG
2- CP(劇品)辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗馬IgM
2- GR(劇品)Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgG
2- Standard for GC(劇品)Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgG
鎢 99.95%,0.5mm 直徑PE標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體
鎢 99.95%,0.1mm 直徑辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗人IgA
鎢 9.95%,50μm 標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體
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