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免疫熒光實(shí)驗(yàn)流程是怎樣的呢？2023/10/10: 免疫熒光（immunofluorescence）是一種常用的光學(xué)顯微術(shù)，即用熒光顯微鏡來觀察細(xì)胞中的特定生物分子。免疫熒光依賴于抗體抗原的特異性結(jié)合，然后通過直接標(biāo)記或間接標(biāo)記方法使用熒光分子指征抗體-抗原結(jié)合的位置，以確定目標(biāo)生物分子在細(xì)胞中的位置、豐度和分布情況。那免疫熒光實(shí)驗(yàn)流程是怎樣的呢？一起來學(xué)習(xí)一下吧！1.固定固定液種類：有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇、丙酮等）；交聯(lián)劑（4%PFA、10%中性福爾馬林），固定液的選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性。但針對磷酸化的抗體，不適合用甲醛，會(huì)導(dǎo)

支原體檢測方法有哪些？2023/10/09: 我們在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過程中易受到較多因素影響，導(dǎo)致支原體污染，對此就要對其進(jìn)行支原體檢測，排除被污染的可能，就需要借助相關(guān)的檢測技術(shù)進(jìn)行支原體檢測，那么支原體檢測方法有哪些？常用的是直接培養(yǎng)法、DNA熒光染色法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，PCR檢測法等方法進(jìn)行檢測。1.直接培養(yǎng)法。直接培養(yǎng)法是檢測支原體的標(biāo)準(zhǔn)方法。是把樣品接種到支原體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并通過觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化或是固體培養(yǎng)基上是否生長支原體菌落進(jìn)行判斷，但培養(yǎng)法所需培養(yǎng)時(shí)間較長，要3～4周左右的時(shí)間，其次用培養(yǎng)法不能在同一培養(yǎng)基中

支原體污染是如何預(yù)防？2023/10/09: 我們在做細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，一些“不速之客”的來臨總會(huì)令人頭疼，比如真菌、霉菌、支原體，尤其是支原體總是悄悄的來并對實(shí)驗(yàn)造成極大的影響，那么就讓我們跟隨小編一起來認(rèn)識(shí)一下什么是支原體并且支原體污染是如何預(yù)防呢？支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，形態(tài)結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似，但又比細(xì)菌小，是介于細(xì)菌與病毒之間的微生物。支原體的結(jié)構(gòu)簡單，只有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核糖體、DNA、可溶性RNA和一些其它細(xì)胞內(nèi)含物，支原體的細(xì)胞器只有核糖體。并且支原體體積小，最小的只有0.1μm，部分支原體可通過0.22μm濾器，但過

蛋白提取純化注意事項(xiàng)2023/10/08: 近年來，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，蛋白提取純化技術(shù)已成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中重要的一部分。蛋白提取純化是一項(xiàng)復(fù)雜的技術(shù)，對于許多研究人員來說，它已經(jīng)成為一項(xiàng)難題。本文將介紹一些有關(guān)于蛋白提取純化注意事項(xiàng)，幫助研究人員更好地掌握此項(xiàng)技術(shù)，提高蛋白質(zhì)的質(zhì)量和應(yīng)用效果。一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的細(xì)胞系，如人胚肺細(xì)胞、大鼠肝細(xì)胞等。2.試劑和儀器：蛋白酶抑制劑、PMSF、RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE凝膠、轉(zhuǎn)膜儀等。二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白提取純化是生物化學(xué)領(lǐng)域中一

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)有哪些？2023/10/08: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)方法之一，用于將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞，以便進(jìn)行基因表達(dá)和功能研究。然而在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要注意一些事項(xiàng)以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。接下來就讓我們一起來了解一下在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)有哪些吧！一、細(xì)胞準(zhǔn)備a.細(xì)胞狀態(tài)。使用形態(tài)正常，活率在90%以上的健康細(xì)胞，確保細(xì)胞沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在轉(zhuǎn)染前傳代3-4次。b.細(xì)胞密度。建議在轉(zhuǎn)染前24h接種細(xì)胞，貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞密度一般在70%-90%。c.細(xì)

【干貨】一文了解vero細(xì)胞培養(yǎng)全流程2023/10/07: Vero細(xì)胞系是連續(xù)非整倍體細(xì)胞，連續(xù)細(xì)胞系可以經(jīng)過多次分裂而不衰老，非整倍體是指細(xì)胞中的染色體數(shù)目與通常的不同。與其它普通哺乳動(dòng)物細(xì)胞不同，Vero細(xì)胞還有干擾素分泌缺陷的特點(diǎn)，當(dāng)被病毒感染時(shí)，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對于其它來源的干擾素仍有正常的反應(yīng)。一、基本信息細(xì)胞名稱：Vero非洲綠猴腎細(xì)胞細(xì)胞別稱：VERO;Verdareno細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣生長特性：貼壁生長組織來源：正常腎培養(yǎng)基：MEM+10%FBS+1%PS生長條件：①氣相：95%空氣+5%二氧

染料法如何實(shí)現(xiàn)qPCR的實(shí)時(shí)監(jiān)控呢？2023/10/07: 熒光定量PCR是利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴(kuò)增中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，并進(jìn)行定量分析。我們通常使用染料法實(shí)現(xiàn)qPCR的實(shí)時(shí)監(jiān)控，那么染料法如何實(shí)現(xiàn)qPCR的實(shí)時(shí)監(jiān)控呢？染料法就是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，我們常用的染料就是SYBRGreenⅠ這種染料。這種染料有以下特性：該染料可以非特異地結(jié)合在雙鏈DNA小溝上，而不與單鏈結(jié)合。這里的非特異性是指，只要是雙鏈DNA，它都能結(jié)合上去，不管該雙鏈DNA是否是你期望擴(kuò)增的目標(biāo)基因還是非目標(biāo)基因。這種染料在游離狀態(tài)下幾乎不會(huì)產(chǎn)生熒光，因

Alzet滲透泵2002使用注意事項(xiàng)2023/09/28: Alzet滲透泵2002是一種小型、可植入式的膠囊滲透泵，可應(yīng)用于小鼠、大鼠及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究。該泵無需進(jìn)行外部連接或頻繁處理，就能以恒定的速率持續(xù)給藥1天到14天的時(shí)間。Alzet滲透泵2002泵送率為0.5μl/hr(±0.1μl/hr)，持續(xù)時(shí)間為14天，泵容量為200μl。Alzet滲透泵2002由3個(gè)組件組成，分別是：灌注管(fillingtube)、流量調(diào)節(jié)器(flowmoderator)、泵(pumpbodymaterials)。為了更好的使用Alzet滲透泵2002，在使用時(shí)，有

Alzet滲透泵工作原理2023/09/28: Alzet滲透泵(ALZETOsmoticPump)，又名為Alzet植入式膠囊滲透壓泵，是一種高效動(dòng)物給藥系統(tǒng)。Alzet滲透泵體積小巧，常用于大鼠、小鼠及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的藥劑泵送。Alzet滲透泵共有12個(gè)型號(hào)的產(chǎn)品，可根據(jù)給藥時(shí)間、給藥速度來選擇合適的型號(hào)，具體的產(chǎn)品型、泵容積、泵送速率見下表：Alzet滲透泵可植入動(dòng)物的皮下或者腹腔內(nèi)，亦可連接上導(dǎo)管，輸送到動(dòng)脈或者靜脈內(nèi)，從而到達(dá)局部組織或者器官，從歷年的文獻(xiàn)來看，科學(xué)家們已經(jīng)將Alzet滲透泵應(yīng)用到了如腦、脊髓、肝臟、脾臟等器官或組織，

Alzet滲透泵技術(shù)手冊2023/09/28: 一、Alzet滲透泵介紹Alzet滲透泵小巧，可植入大、小鼠，及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。這些可灌流的植入式膠囊滲透泵可以一定的釋放速率連續(xù)的釋放藥物、荷爾蒙及其他各種藥劑，可控制在一天到六周的期間，不需要連接任何外接的裝置及做其他的處理，因而可以免去在夜間或周末還要去投放劑量。Alzet滲透泵可被植入在皮下或腹腔內(nèi)，用在全身性服藥的反應(yīng)。它們可被接上導(dǎo)管而輸出到靜脈或動(dòng)脈內(nèi)?；蛘?，它們可接導(dǎo)管，被用在給予到特定的標(biāo)的物上，讓藥物或藥劑的反應(yīng)可發(fā)生在局部的組織或器官上。這些植入式膠囊滲透泵已經(jīng)被實(shí)際用在

ALZET滲透泵使用指南2023/09/27: ALZET滲透泵有多種尺寸、持續(xù)時(shí)間和流量可供選擇，以滿足廣泛的研究需求。每種型號(hào)的滲透泵送速率在制造時(shí)是固定的，但可通過改變每臺(tái)滲透泵中填充的藥劑濃度來調(diào)整輸送藥劑的劑量。如果動(dòng)物足夠大，可同時(shí)植入多個(gè)滲透泵，以獲得比單滲透泵更高的輸送速率。對于更長時(shí)間的輸送，滲透泵可以連續(xù)植入，而不會(huì)產(chǎn)生不良影響。一、動(dòng)物注意事項(xiàng)ALZET滲透泵可根據(jù)以下動(dòng)物尺寸指南植入皮下或腹腔。ALZET滲透泵也可連接到導(dǎo)管，以將泵內(nèi)物直接輸送到靜脈或動(dòng)脈系統(tǒng)、大腦或任何器官或組織中。我們建議使用最小尺寸的滲透泵，以確

支原體污染對于細(xì)胞培養(yǎng)有什么危害呢？2023/09/27: 當(dāng)我們在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，有可能會(huì)出現(xiàn)如下的狀況：細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)。如果排除了實(shí)驗(yàn)過程中其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那我么就要高度要注意：細(xì)胞可能出現(xiàn)了支原體污染。細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)生支原體污染的機(jī)率會(huì)高達(dá)到70%左右，常規(guī)抗生素的使用對支原體幾乎無效。那么支原體污染對于細(xì)胞培養(yǎng)有什么危害呢？細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)剛開始支原體污染沒有混濁，PH變化及細(xì)胞病理變化不顯著，沒有明顯可見的污染跡。但是支原體污染能

在WB實(shí)驗(yàn)中，抗體應(yīng)保存在什么溫度下？2023/09/22: 我們在做WB實(shí)驗(yàn)中抗體的有效保存可以提高實(shí)驗(yàn)成功的概率。例如不同的抗體對其保存溫度有不同的要求，當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)WB實(shí)驗(yàn)竟然被卡了一周，究其原因是抗體失效了。原來是將應(yīng)該存放于-20℃的抗體放在了4℃冰箱里并保存了數(shù)月，固然抗體很不幸的失效了?？磥硎菚r(shí)候強(qiáng)調(diào)一下抗體保存條件的重要性了?？贵w在適宜的條件下一般都可以保存幾個(gè)月至幾年。抗體的保存主要有三點(diǎn)值得需要注意的地方：保存的溫度、濃度和抗菌操作。那么今天我們先了解一下在WB實(shí)驗(yàn)中，抗體應(yīng)保存在什么溫度下？大部分的抗體被分裝為小等份放在-20℃或-

DMEM 和RMPI1640兩款細(xì)胞培養(yǎng)基有什么不同?2023/09/21: 在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基對于細(xì)胞良好的生長狀態(tài)有著重要的作用，培養(yǎng)基是模擬細(xì)胞在人體內(nèi)或動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞生長的液體環(huán)境，為細(xì)胞提供充分的營養(yǎng)物質(zhì)，所以我們想要做好細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)選擇正確的培養(yǎng)基成為了實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵。目前市場上為科研人員所熟知的兩款培養(yǎng)基分別是DMEM培養(yǎng)基和RMPI1640培養(yǎng)基，接下來就讓我們探討一下DMEM和RMPI1640兩款細(xì)胞培養(yǎng)基有什么不同，在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中可以通用嗎？DMEM培養(yǎng)液：DMEM是在zui低必需培養(yǎng)基(Eagle"sminimumessentialmediu

怎樣制備IHC樣品?2023/09/20: IHC是指免疫組織化學(xué)，是許多實(shí)驗(yàn)室里都會(huì)運(yùn)用到的主要免疫測定方法，用來證明重要蛋白質(zhì)是否存在，檢測翻譯后修飾，診斷疾病等等。IHC利用免疫學(xué)和生化技術(shù)并通過與目標(biāo)抗原相互作用的標(biāo)記抗體來檢查不同的組織切片?？贵w抗原相互作用的可視化可以使用可見標(biāo)記或者染色劑體現(xiàn)出來。IHC具有可視化細(xì)胞的獨(dú)te細(xì)胞成分的作用，廣泛被病理學(xué)家和診斷人員使用。我們在進(jìn)行IHC實(shí)驗(yàn)前一般都要制備樣品，那么怎樣制備IHC樣品呢？樣品制備如下：1.在室溫環(huán)境下用2%多聚甲醛將新鮮解剖的組織(2.沖洗組織：使用流動(dòng)的自來水

NK細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)有哪些？2023/09/20: 自然殺傷（NK）作為免疫細(xì)胞治療技術(shù)中具有代表性的細(xì)胞之一，于1975年被學(xué)者Kiessling發(fā)現(xiàn)并命名,其起源于骨髓中的淋巴前體細(xì)胞，并在發(fā)育成熟后廣泛分布于外周血、骨髓、淋巴結(jié)、脾臟、肺和肝臟中。NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的重要組成的一部分，它來源于CD34+造血干細(xì)胞，因其可以在沒有抗原預(yù)敏的條件下以主要組織相容性復(fù)合體（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）非限制性方式快速殺傷靶細(xì)胞而成為免疫治療的研究熱點(diǎn)。原代NK細(xì)胞是一種比較難培養(yǎng)的細(xì)胞,很多同學(xué)在培養(yǎng)

蛋白Marker有哪些分類？2023/09/19: 蛋白Marker是蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是一些已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。Marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量精確無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，因此選擇正確的蛋白Marker也是WB實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。那么你知道蛋白Marker有哪些分類嗎？總體來說目比較常用的蛋白Marker分為非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker。非預(yù)染蛋白Marker是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液，方便不同大小的蛋白進(jìn)行比較。非預(yù)染的Ma

處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本的注意事項(xiàng)有哪些？2023/09/19: RT-qPCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增結(jié)合起來，并對起始模板進(jìn)行定量分析的技術(shù)。目前RT-qPCR應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，在科研端可用于基因表達(dá)量分析、病原體檢測、RNA干擾驗(yàn)證，同時(shí)也是分子體外診斷的行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)，例如在臨床疾病診斷、動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫、食品安全和科學(xué)研究等應(yīng)用場景均有涉及，肝炎、艾滋病、流感、登革熱、感染性腹瀉等的檢測、診斷和治療上發(fā)揮著重要作用。那么在實(shí)驗(yàn)過程中，我們?nèi)绾握_處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本以提取到高質(zhì)量的RNA是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本的注意

凝膠過濾層析（SEC）的蛋白純化方法是怎樣的呢？2023/09/18: 凝膠過濾層析（SEC）的蛋白純化方法是怎樣的呢？凝膠過濾層析又稱為分子篩或排阻層析，是利用蛋白分子大小和形狀的不同進(jìn)行分離。以惰性細(xì)顆?；|(zhì)作為層析柱填料，由于液體的擠壓，大分子物質(zhì)因無法進(jìn)入細(xì)顆粒的微孔中而隨著液體從細(xì)顆粒間的縫隙流出，而小分子因進(jìn)入細(xì)顆?；|(zhì)內(nèi)微孔運(yùn)動(dòng)速度慢，保留時(shí)間長，比大分子物質(zhì)流出緩慢而分離。凝膠過濾的層析樣品不與層析柱料結(jié)合，因此，緩沖液成分不直接影響分辨率。凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個(gè)顆粒內(nèi)部都具有很多細(xì)微的

用Trizol法提取RNA的實(shí)驗(yàn)步驟2023/09/18: RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。今天我們一起來了解一下用Trizol法提取RNA的實(shí)驗(yàn)步驟。以提取組織細(xì)胞為例：1.提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1mlTrizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；2.將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯fang的量加入氯

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