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實驗器皿正確清洗的方法2022/01/27

常規(guī)洗滌法（一般容器）：1.清洗實驗器皿前先用肥皂洗手。2.先用自來水沖去灰塵，再用毛刷蘸洗滌劑液仔細(xì)刷凈內(nèi)外表面，之后邊刷邊用水沖至無洗滌劑液;3.再用自來水沖洗3～5次，去離子水沖洗3次。4.不便刷洗的實驗器皿先用洗滌劑液浸泡后用水沖洗。洗凈的玻璃器皿內(nèi)外不掛水珠，器壁上殘留的水用指示劑檢查為中性。5.去污粉不得用于洗滌刻度器皿和玻璃儀器內(nèi)壁，以防劃傷玻璃。不同材質(zhì)器皿的洗滌：1.銀、鎳和鐵質(zhì)器皿用NaOH熔融，也可用1：3稀HCl短時間浸泡后用水沖洗2.瑪瑙器皿不宜浸洗，要先用洗滌劑洗后用

超氧化物歧化酶3抗體的鑒定2022/01/18

超氧化物歧化酶3抗體的鑒定：1、抗體的效價鑒定：鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗來鑒定。2、抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并

馬克斯克魯維酵母菌種的培養(yǎng)過程2022/01/11

菌種的培養(yǎng)過程：1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）知識小課堂2022/01/05

FCM是利用流式細(xì)胞儀對處在快速直線流動狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分析技術(shù)。然而，在FCM的實際應(yīng)用過程中，要想得到高質(zhì)量的流式數(shù)據(jù)卻并非易事?，F(xiàn)就FCM實驗中的常見問題進(jìn)行分析，希望能幫助相關(guān)實驗人員提高實驗成功率。1.怎么選擇合適的對照？1）同型對照：使用同型抗體做平行實驗，主要目的是消除抗體與樣本的非特異性結(jié)合。2）陰性細(xì)胞對照：使用已知的不表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞做平行實驗，主要目的是消除抗體的非特異性結(jié)合。3）二抗對照：第二抗體多為熒光標(biāo)記的多抗，非特

?Real-Time qPCR常見問題解析2021/12/21

1.無Ct值出現(xiàn)1）、檢測熒光信號的步驟有誤:一般SG法采用72℃延伸時采集，Taqman法則一般在退火結(jié)束時或延伸結(jié)束采集信號。2）、引物或探針降解:可通過PAGE電泳檢測其完整性。3）、模板量不足:對未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起。4）、模板降解:避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況。2.Ct值出現(xiàn)過晚（Ct38）1）、擴(kuò)增效率低:反應(yīng)條件不夠優(yōu)化。設(shè)計更好的引物或探針；改用三步法進(jìn)行反應(yīng)；適當(dāng)降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。2）、PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足。3

被污染的細(xì)胞清除辦法2021/12/15

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細(xì)菌和真菌的清除抗生素對殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemo

小鼠β2微球蛋白elisa酶聯(lián)免疫試劑盒樣品處理及保存2021/12/09

小鼠β2微球蛋白elisa酶聯(lián)免疫試劑盒靈敏性高，高效性，*抗體，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強(qiáng)，無效包退包換，公司提供免費(fèi)代測服務(wù)，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。英文縮寫：BMG/β2-MGELISAKit產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。小鼠β2微球蛋白elisa酶聯(lián)免疫試劑盒樣品收集、處理及保存：1.細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。2.細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到1

粘蛋白3 elisa定量檢測試劑盒雙抗體夾心法2021/11/29

雙抗體夾心法(檢測未知抗原):1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。5、終

小鼠elisa定量檢測試劑盒特點及技術(shù)原理2021/11/16

特點：一、高效、靈敏、特異的抗體；二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；五、節(jié)省實驗經(jīng)費(fèi)。技術(shù)原理：(1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。(2).結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。(3).酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。(4).受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。(5).此時固相上

?大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒使用過程2021/11/08

大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒使用過程：1.大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮.2.用戶在初度運(yùn)用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底.3.每次試驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4.丈量時先用此孔調(diào)OD值至零.4.要確保微量加樣器的精確性,能夠運(yùn)用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定（因為蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水能夠看作是lg200L的水能夠看作是0.2g）每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程

PCR鑒定試劑盒操作過程說明2021/11/03

操作流程:1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物

鼠單抗Ig類ELISA試劑盒使用方法2021/10/26

使用方法：1、將ELISA試劑盒各組分恢復(fù)室溫（大約30分），同時用純水將20×洗滌液配成工作液（每份濃縮洗滌液加19份純水）。2、取出酶標(biāo)板；扣取適量酶標(biāo)板條，每個標(biāo)本需要8孔，陽性對照8孔，陰性對照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。3、將標(biāo)本檢測孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標(biāo)微孔板，每個標(biāo)本加8孔；陽性對照和陰性對照孔不加標(biāo)本稀釋液，各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。4、反應(yīng)完畢后棄去板內(nèi)液體，洗板5

解說酶聯(lián)免疫試劑盒保存溫度控制2021/10/20

酶聯(lián)免疫試劑盒溫度：1.試劑盒回溫：大多數(shù)ELISA檢測試劑盒為冷藏保存。從冰箱拿出來后，先不要急于打開試劑盒，要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無冷凝水。檢測所用的試劑需充分混勻且*溶解后再用。2.環(huán)境溫度的控制：實驗室應(yīng)配備溫濕度表，且確保定期計量。根據(jù)天氣情況設(shè)定實驗室空調(diào)制冷或加溫功能，待室溫穩(wěn)定且無干擾的條件下再開始檢測流程。選用帶溫控裝置的孵育儀器，如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開啟預(yù)熱。大多數(shù)試劑盒加樣后反應(yīng)時間較短，環(huán)境溫度對檢測結(jié)果會有很大影響，所以

細(xì)胞培養(yǎng)常用的幾種試劑2021/10/12

細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必須的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。接下來來了解在培養(yǎng)細(xì)胞的實驗中有有幾種試劑：（1）高糖DMEM溶液：用新配制的三蒸水配制，高糖DMEM干粉（規(guī)格10×1L），溶入約總量的1/3的三蒸水，并用水洗凈包裝袋，在磁力攪拌器上攪拌30分鐘，加入NaHCO23.75克，補(bǔ)加水至最終量。用1NHCL調(diào)整PH為7.2，0.22μm濾膜抽濾除菌，分裝-2

PCR假陰性不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶原因與對策2021/10/08

1、模板原因①模板中含有雜蛋白質(zhì)。②模板中含有Taq酶抑制劑。③模板中蛋白質(zhì)沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白。④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不*。在酶和引物質(zhì)量好時，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應(yīng)固定不宜隨意更改。2、酶失活①需更換新酶，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導(dǎo)致假陰性。②忘加Taq酶或溴乙錠。3、引物①引物質(zhì)量。②引物的濃度。③兩條引物的濃度是否對稱。解決對

粘液素7酶聯(lián)免疫試劑盒試劑實驗測定2021/09/29

一、定性測定(1)陽性判定值法(cut-offvalue，CO值)：一般為陰性對照的平均A值加一個常數(shù)，試劑制備嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化，要先計算出陽性對照A值平均數(shù)和陰性對照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽性。(2)抑制率法：在競爭抑制法中結(jié)果可用抑制率表示。抑制率(％)＝(A陰性對照A-A待測)／陰性對照X100％,一般以抑制率≥50％為陽性二、半定量測定結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后，進(jìn)行ELISA檢測，在陽性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度"。三、定量測定即用己知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列

平板克隆實驗具體過程2021/09/24

一、6孔板1.將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞胰酶消化后，*培養(yǎng)基（基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%胎牛血清）重懸成細(xì)胞懸液，并計數(shù)；2.細(xì)胞接種：于6孔板培養(yǎng)板中各實驗組接種400-1,000個細(xì)胞/孔（根據(jù)細(xì)胞生長情況確定，一般為700個細(xì)胞/孔）;3.繼續(xù)培養(yǎng)到14天或絕大多數(shù)單個克隆中細(xì)胞數(shù)大于50為止，中途每隔3天進(jìn)行換液并觀察細(xì)胞狀態(tài)；4.克隆完成后，在顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行拍照，然后PBS洗滌1次，每孔加入1mL4%多聚甲醛固定30-60min，PBS洗滌1次；5.每孔加入結(jié)晶紫染液1ml，染細(xì)胞10-20m

設(shè)計抗原遵循四個基本原則2021/09/15

想要以高成功率獲取特異性好、有效性高的抗體，第一步抗原設(shè)計至關(guān)重要。目前，用于免疫抗體的抗原一般有多肽抗原和重組抗原。兩種抗原各有優(yōu)劣，多肽抗原理論上來說可以產(chǎn)生高特異性、針對特定抗原表位的抗體；缺點是免疫原性較低，需要和載體偶聯(lián)以增強(qiáng)免疫原性，這增加了抗原制備成本，另外還會產(chǎn)生大量針對載體的非特異性抗體，增加了后續(xù)純化和篩選成本。重組抗原免疫原性強(qiáng)，包含抗原表位多，用于制備抗體，相對成功率較高；但也有缺點，重組抗原一般采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，原核表達(dá)系統(tǒng)的蛋白質(zhì)折疊方式與真核生物的有所差異，另外

生化檢測樣本保存處理方法2021/09/07

除了部分有機(jī)鹽類之外，大部分被測指標(biāo)都易受氧化、光照分解、生物降解，為了避免樣品中被測指標(biāo)分解或產(chǎn)生其他化學(xué)變化，取樣后最好立即進(jìn)行分析檢測。但實際工作中幾乎無法做到，常需將收集到的樣品冷藏、冰凍，臨用前再融化使用。激素類：檢驗按照待測指標(biāo)的特性取材即刻檢測，或是選擇-80℃凍存，避免反復(fù)凍融，且避免水浴時間過長，建議凍融即開始檢測（注意吹打混勻）。蛋白類：在-80℃中相對保存時間較長，但反復(fù)凍融極易破壞穩(wěn)定性，水浴更容易被細(xì)菌或樣本內(nèi)自身的酶降解。其中抗體類蛋白最為穩(wěn)定，IgG甚至能在血清中4

選購標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)實用指南2021/09/02

在選擇、購買標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時，應(yīng)考慮以下要素：（1）特性量的種類及定值方法：某些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可能只適用某一特定方法或?qū)兕I(lǐng)域的應(yīng)用，某些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的值有特殊規(guī)定，如含結(jié)晶水的值，應(yīng)對證書中該類說明加以注意，防止誤選誤用；（2）特性量水平：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量水平應(yīng)與日常測量樣品的水平匹配；（3）可接受的不確定度水平：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性量的相關(guān)不確定度水平應(yīng)與日常測量中的精密度和正確度限度要求匹配；（4）基體及可能的干擾：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于開展方法確認(rèn)、質(zhì)量控制以及一些基體效應(yīng)較為嚴(yán)重的測量方法的校準(zhǔn)時，基體應(yīng)與日常測量樣品