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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第10年
重鏈抗原性不同各類抗體的主要功能2022/06/28
抗體依據(jù)重鏈抗原性的不同分為五類:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有:1、IgG:血清中含量最高,因此是最重要的抗感染分子,包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補(bǔ)體,結(jié)合并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能(調(diào)理作用和ADCC效應(yīng)),穿過胎盤,保護(hù)胎兒及新生嬰兒免受感染。2、IgA:分單體和雙體兩種。前者存在血清中,后者存在于黏膜表面及分泌液中,是黏膜局部抗感染的重要因素。3、IgM:是分子量最大,體內(nèi)受感染后最早產(chǎn)生的抗體,具有很強(qiáng)的激活補(bǔ)體和調(diào)理作用,因此是重要的抗感染因子
夾心 ELISA 檢測(cè)操作步驟2022/06/21
夾心ELISA測(cè)定兩層抗體(捕獲抗體和檢測(cè)抗體)之間的抗原。目標(biāo)抗原必須包含至少兩個(gè)能夠結(jié)合到抗體的抗原表位。單克隆或多克隆抗體均可在夾心ELISA系統(tǒng)中用作捕獲抗體和檢測(cè)抗體。單克隆抗體識(shí)別單一表位,可對(duì)抗原中微小差別進(jìn)行定量檢測(cè)。多克隆抗體通常用作捕獲抗體以沉降盡可能多的抗原。夾心ELISA省去了分析之前的樣品純化步驟,而且提高了分析靈敏度(靈敏度比直接或間接ELISA高2-5倍)。夾心ELISA程序可能難以優(yōu)化,應(yīng)使用已測(cè)試的匹配抗體對(duì)。這樣可確??贵w檢測(cè)靶蛋白上的不同表位,而不會(huì)干擾其它
細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)小結(jié)2022/06/14
細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)小結(jié):1.買細(xì)胞要去靠譜的地方買,比如ATCC或者素冉生物。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細(xì)胞,還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,可以買個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。4.不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞處理操作說明2022/06/10
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞處理操作說明:1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:1).棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2).加
小鼠主動(dòng)脈組織提取物?操作流程2022/06/07
小鼠主動(dòng)脈組織提取物操作流程:1.1產(chǎn)品僅用于科研主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本olympusimt-413),co2孵箱(日本yamatoit-61)。1.2細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:1.2.1細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液,以1×1
總結(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因2022/05/31
解析細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因1、培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長(zhǎng)所需的某種因子。通常情況下,當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞,并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫的方法制備培養(yǎng)基,使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照的方法制備培養(yǎng)基,或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。2、細(xì)菌、支原體、真菌等污染。雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(和),但如果無菌操作觀念不強(qiáng),仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞,可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然,丟棄并不是隨意的,扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培養(yǎng)物,建議培養(yǎng)箱*消毒。如
大鼠甘油三酯elisa酶聯(lián)免疫試劑盒使用方法2022/05/23
大鼠甘油三酯elisa酶聯(lián)免疫試劑盒使用方法:1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入DetectionAb工作液100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘
豌豆內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程2022/05/17
豌豆內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程:1.產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。3.RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等
傳代培養(yǎng)?實(shí)驗(yàn)步驟2022/05/09
傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。也是幾乎所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,細(xì)胞才能繼續(xù)生長(zhǎng)。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。傳代要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行,每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無菌操作。實(shí)驗(yàn)步驟:1.入無菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒雙手。2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。3.超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。4.打開超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20mi
創(chuàng)傷弧菌快速檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟2022/04/24
試劑準(zhǔn)備:1.DNA模板2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)3.10×PCRBuffer4.2mMdNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5.Taq酶操作步驟:1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。10×PCRb
收到細(xì)胞處理流程2022/04/19
收到細(xì)胞處理流程:1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)
RNA的提取與核酸的顏色反應(yīng)操作步驟2022/04/13
RNA的提取與核酸的顏色反應(yīng)操作步驟:1.取材在天平上準(zhǔn)確稱取干酵mu3.00g,轉(zhuǎn)移至100mL錐形瓶中。2.濃鹽浸提取27mL10%NaCl溶液,加入到含干酵mu的錐形瓶中,攪拌均勻;置于90~100°C水浴中,浸提30~60分鐘;冷卻。3.離心將錐形瓶中提取液和沉淀全部轉(zhuǎn)移至100mL離心管中,取10mLH2O洗滌錐形瓶,并入離心管中;平衡后以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘;將上清液(即RNA提取液)傾入50mL燒杯中,棄去沉淀(菌體殘?jiān)?.沉淀RNA(1)冷卻:將50mL燒杯置于放有冰
熒光素的選擇參考五個(gè)方面2022/04/02
在流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn),各種熒光素標(biāo)記的抗體是必須的。那么熒光素該如何選擇呢,通常會(huì)參考以下5個(gè)方面:1.流式細(xì)胞儀配置:儀器需滿足激光管可激發(fā)相應(yīng)的熒光素且可同時(shí)檢測(cè)所需的熒光。附常見熒光素的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng):2.染料的亮度與抗原表達(dá)量相匹配:低表達(dá)抗原,推薦使用亮熒光染料;高表達(dá)抗原,推薦使用弱熒光染料。3.熒光染料重疊最小化:盡量選擇光譜重疊小的熒光素,如FITC/PE-Cy7;選擇不同激光激發(fā)的熒光素,如FITC/APC,PE/APC。光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時(shí)檢測(cè)會(huì)導(dǎo)致熒光溢漏,需調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
小鼠多配體聚糖1 elisa定量檢測(cè)試劑盒雙抗體夾心法2022/03/29
小鼠多配體聚糖1elisa定量檢測(cè)試劑盒用途:用于測(cè)定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原):1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗
?小鼠骨髓瘤細(xì)胞復(fù)蘇操作要點(diǎn)2022/03/22
小鼠骨髓瘤細(xì)胞復(fù)蘇操作要點(diǎn):1、將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。2、將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。3、用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的
解析Western blot(WB)實(shí)驗(yàn)原理2022/03/16
WB是一種把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持物(NC膜或PVDF膜),并以針對(duì)特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測(cè)。WB采用抗體作為探針,抗體可以與附著在固相支持物的靶蛋白的抗原表位發(fā)生抗原-抗體免疫反應(yīng)。這種技術(shù)的作用是對(duì)細(xì)胞或組織提取的蛋白混合物(即總蛋白混合物)中的某一特異蛋白進(jìn)行鑒別和半定量分析,旨在鑒別特異性蛋白的類型(如亞型、聚體、剪切體等)和蛋白表達(dá)量的變化。WB可大致分為以下7步,分別是蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE電泳、電轉(zhuǎn)印、封閉、抗原-抗體免疫反應(yīng)、蛋白檢測(cè)。
大鼠外周血白細(xì)胞產(chǎn)品特點(diǎn)2022/03/07
產(chǎn)品特點(diǎn):1、使用方便:不需昂貴設(shè)備。2、可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。3、將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。4、采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。5、含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。6、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋
甘油三酯的提取2022/03/01
甘油三酯,它是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,也是人體內(nèi)含量最多的脂類,大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量,同時(shí)肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成,在脂肪組織中貯存。它不僅是細(xì)胞膜的主要成分,也是重要的呼吸底物和供能物質(zhì),在脂肪酸運(yùn)輸過程中具有重要作用。血清中內(nèi)源性三酰甘油主要以VLDL的形式運(yùn)輸,外源性三酰甘油主要以CM的形式運(yùn)輸,甘油三酯含量的增高與動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病密切相關(guān)。甘油三酯經(jīng)KOH皂化水解生成甘油及脂肪酸,過碘酸氧化甘油生成甲醛,在銨離子存在下甲醛能夠與乙酰
了解流式抗體選擇要素2022/02/22
1.流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件:目標(biāo)蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。2.流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過程中,盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過程,以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記。3.流式抗體熒光標(biāo)記的選擇:如果實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單一指標(biāo):不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。FACSCalibur儀器為例:PEAPCPE-Cy5PerCPFITCPerCP-Cy5.5,通常來說
細(xì)胞因子風(fēng)暴是什么2022/02/14
細(xì)胞因子又稱炎癥風(fēng)暴,是指機(jī)體免疫系統(tǒng)過度激活時(shí),液中多種細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8等迅速大量產(chǎn)生的現(xiàn)象,是引起急性呼吸窘迫綜合癥和多器官衰竭的重要原因。一旦發(fā)生細(xì)胞因子風(fēng)暴可迅速引起單器官或多器官功能衰竭,較終威脅生命。免疫細(xì)胞通過細(xì)胞因子彼此溝通,細(xì)胞因子是細(xì)胞釋放到血液中的小分子,可以令免疫細(xì)胞沖到感染部位、吞噬遭到損傷的細(xì)胞,甚至穿透血管壁。細(xì)胞因子還可以引發(fā)炎癥,令被破壞的機(jī)體腫脹、發(fā)熱以及疼痛。細(xì)胞因
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