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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6355 |
商品介紹
測(cè)定意義 ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。 測(cè)定原理: 利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測(cè)定NADPH濃度的增加。 所需的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
乙 AR,99.0%β-萘酚 ARNrf2 peptide 核因子2相關(guān)因子2抗原
己二酸 超純級(jí),≥99.5% (HPLC)β-萘酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5%(GC)NRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原
苯 ACS, ≥99.0%β-萘酚 熒光指示劑, ≥99.0% (GCNSE (neuron specific enolase) 神經(jīng)元特異性烯化抗原
酮 AR,99.5% (劇品) Standard for GC,≥99.8% (GC)NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide) 鈉離子/?;悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原
酮 光譜級(jí),≥99.5%(GC)鄰苯二 AR,98%Obestatin/Ghrelin/GHRP 肥胖抑制素抗原
酮 色譜級(jí),≥99.8%(GC)3-二乙基 99%OCLN(Occluding) 咬合蛋白抗原
乙酸酐 AR,98.5%(易制品)N,N-二甲基正辛 95%Oct-4(Octamer-4) 胚胎干關(guān)鍵蛋白抗原
冰乙酸 AR,99.5%癸 98%ODC(Ornithine decarboxylase) 脫羧抗原
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法多效唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(HPLC)大象雌激素(E)免疫試劑盒三焦抗體GFP 綠色熒光蛋白抗體
多效唑標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:植物ELISA試劑盒2,3-雙加氧抗體GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)
多效唑標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:植物蔗糖合成(SPS)免疫試劑盒白介素19抗體GFOD2 葡萄糖果糖還原2抗體
二戊樂靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%植物玉米素核苷(ZR)免疫試劑盒抑制素A/Inhibin α抗體GFI1B 獨(dú)立生長(zhǎng)因子1B抗體
二戊樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮植物乙(IAA)免疫試劑盒胰島素因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1/2抗體GFAP delta 膠質(zhì)纖維性蛋白GFAPδ抗體
二戊樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮植物K1(VK1)免疫試劑盒化白介素-1受體相關(guān)激1抗體GFAP 膠質(zhì)纖維性蛋白抗體
猛殺威 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%植物E(VE)免疫試劑盒化白介素-1受體相關(guān)激1抗體GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體
咪鮮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,95.5%植物3(VD3)免疫試劑盒化白介素-1受體相關(guān)激1抗體Gephyrin 橋尾蛋白抗體
咪鮮標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:植物2(VD2)免疫試劑盒干擾素調(diào)節(jié)因子3Gentamicin(3G7) 素單克隆抗體
咪鮮標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:植物(VD)免疫試劑盒化干擾素調(diào)節(jié)因子3Gentamicin 素抗體
嘧霉 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%植物C(VC)免疫試劑盒干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Geminin DNA復(fù)制抑制因子抗體
甜菜寧 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%植物B6(VB6)免疫試劑盒化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Gelsolin 凝溶膠蛋白抗體
戊菌隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%植物B12(VB12)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD5 甘油二酯結(jié)構(gòu)域5抗體
嘧肟草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%植物A(VA)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD3 甘油二酯結(jié)構(gòu)域3抗體
菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%,體:正己烷植物茄呢2,葉綠體(SPS2/SPPS)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD2/GDE3 促進(jìn)成骨分化因子抗體
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。