操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 10管/9樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6366 |
商品介紹:
測(cè)定意義
細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累是脂質(zhì)合成與分解失衡的結(jié)果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰和丙二酰而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
測(cè)定原理
以NADPH為還原力,F(xiàn)AS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成長(zhǎng)鏈脂肪酸;通過(guò)測(cè)定NADPH的減少量,即可推算出FAS活性。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器和用品
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
小鼠腎損傷分子1Anti-PEX5 Antibody人Rap交換因子1(RAPGEF1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人角蛋白20Anti-PEX3 Antibody人S抗原(SAG)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠骨粘連蛋白Anti-PEX7 Antibody人43KDa Tar DNA結(jié)合蛋白(TDP43)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠抗單核抗體Anti-PEX7 Antibody人T急性母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠脂蛋白αAnti-PFKFB1 Antibody人β-骨膠原交聯(lián)(β-CTx)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人β內(nèi)啡肽Anti-PFKFB2 Antibody人半乳糖苷α(GLα)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠游離脂肪酸Anti-PFKP Antibody人半乳糖苷β(GLβ)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人N端前腦鈉素Anti-PFKM Antibody人GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)elisa定量檢測(cè)試劑盒
脂肪酸合成酶(FAS)紫外分光光度法銻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L,溶劑:1%鹽Schlafen家族14抗體
銻標(biāo)準(zhǔn)溶液1.24±0.26mg/LSEMCAP3蛋白抗體
砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L,溶劑:微量鹽小泛素相關(guān)修飾蛋白1抗體
中標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Smad蛋白相互作用蛋白1抗體
水質(zhì)標(biāo)樣 濃度范圍:0.9,2.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品 細(xì)菌表面蛋白抗體
烯標(biāo)準(zhǔn)溶液7.0mg/L,溶劑:二硫化碳化14-3-3 α/β/ζ抗體
烯-2,4-二腙 分析標(biāo)準(zhǔn)品絲氨棕櫚酰轉(zhuǎn)移1抗體
中阿特拉津標(biāo)樣 濃度范圍:100(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體
氨標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L,溶劑:水分揀微管連接蛋白抗體
氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml絲氨蛋白抑制劑A10抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L,溶劑:水絲氨蛋白抑制劑B1抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:絲氨蛋白抑制劑B11抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.989mg/ml,體:絲氨蛋白抑制劑B3抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,溶劑:絲氨/蘇氨蛋白激SIK2抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%神經(jīng)元特異性蛋白3抗體