商品介紹
測(cè)定意義 CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中,能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng),在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用,是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。 測(cè)定原理: CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6363 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
Pichia fermentans膽囊收縮素;縮膽囊素八肽檢測(cè)試劑盒
Candida ethanolicaNoggin檢測(cè)試劑盒
Candida pseudolambica血小板內(nèi)皮粘附分子6檢測(cè)試劑盒
Cryptococcus laurentii可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化檢測(cè)試劑盒
Cryptococcus flavus克拉拉蛋白檢測(cè)試劑盒
Cryptococcus laurentii膽固?;D(zhuǎn)移檢測(cè)試劑盒
Cryptococcus laurentii中性粒胞外誘捕網(wǎng)絡(luò)檢測(cè)試劑盒
Cryptococcus flavus3羥基3甲基戊二酰輔A合1檢測(cè)試劑盒
肌酸激酶(CK)微量法檢測(cè)試劑盒4-氨-3-(三氟) 98%T淋巴凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體AMIGO1 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
3-氨-4-三氟 98%蛋白調(diào)解因子9抗體AMID/AIFM2 線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體
4-氨-2-氟三氟 97%胰抗體AMH/MIS Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體
2-氨-4,5-二氟 98%纖溶相關(guān)蛋白B2抗體AMFR/Gp78/RNF45 環(huán)指蛋白45/自分泌運(yùn)動(dòng)因子受體抗體
4-氨-2-氟 98%多聚合α/β/γ抗體AMBRA1 自噬相關(guān)因AMBRA1抗體
5-氨-2-氟 99%含脯氨突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體AMBP/Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗體
4-溴-2-(三氟氧) 98%外周蛋白2抗體AMACR/P504S α-酰輔A消旋抗體
2-溴-3-氟吡 98%區(qū)帶蛋白PZP抗體ALT1 谷氨氨轉(zhuǎn)移1抗體
2-溴-4-氟吡 96%蛋白香葉烯轉(zhuǎn)移1β(FTβ)抗體ALS2CR8 肌側(cè)索硬化2染色體區(qū)域候選蛋白8抗體
2-溴-6-氟吡 98%原鈣粘蛋白15抗體ALS2CR4 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體
3-溴-5-(三氟)吡 97%原鈣粘蛋白β2抗體ALR 肝再生增強(qiáng)因子抗體
2-溴-5-氟-3-吡 97%原鈣粘蛋白β4抗體ALPK3 α蛋白激3抗體(心肌)
4-溴-3-(三氟) 98%原鈣粘蛋白γ10抗體Alpha-Synuclein/Syn/SNCA 核突觸蛋白α抗體
5-溴-2-氟三氟 98%原鈣粘蛋白γA4抗體alpha-Synuclein(NT) 核突觸蛋白-α抗體(N端)
2-溴-5-硝三氟 98%原鈣粘蛋白γA2抗體alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷抗體