細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度也不一樣來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期。

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
繡球Hydrangea macrophylla Rubiarbonol B 茜草喬木醇 B 130288-60-7 C30H50O3 ≥98%

安格洛甙CcngqloglycosidqCHPLC≥98%;20mg/支

術(shù)內(nèi)酯II;蒼術(shù)內(nèi)酯II Atractylenolide II 73069-14-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

HPLC法含量測(cè)定*100654-200401常溫，避光50mg

Erythritol赤蘚糖醇標(biāo)準(zhǔn)品149-32-6200mg
1492-18-8 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg

*Tripterygium wilfordii none 62498-83-3 C32H50O5 ≥95% 孕同雜質(zhì)C(Y000018

erythro-Guaiacylglycerol β-sinapyl eter 877875-96-2

Lanolin Alcohols羊毛脂醇標(biāo)準(zhǔn)品8027-33-6 5g

湖貝甲素;YY90410梭砂貝母堿 98243-57-3 HPLC≥95%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
紫蘇Perilla frutescens (Linn.) Britt. Perillartine 紫蘇葶 30950-27-7 C10H15NO ≥98%

原啊片減ProtopinqHPLC≥98%;20mg/支

蔓荊Vitex trifolia Vitexilactone 牡荊內(nèi)酯 61263-49-8 C22H34O5 (+-脫落酸(5802

UV法含量測(cè)定*100459-200401常溫，避光100mg

*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品40mg
辛酸乙酯，英文名或英文縮寫：etxyl octanoate，級(jí)別：CP，98%，規(guī)格：500克

51005-14-2肌紅蛋白 ≥90% (-20℃)ACTIN FROM RABBIT MUSCLE

曲拉通x-405，英文名或英文縮寫：Triton x-405，級(jí)別：色固，規(guī)格：1克

赤芝酸LM1 Lucidenic acid LM1 (HPLC,≥98%) 364622-33-3 10MG 通用試劑

催化劑 DOYLq DIRHODIUM CcTcLYST-RH2(4S-MqOX)4 863973-63-2
4-(對(duì)硝基本偶氮)-1-奈酚，英文名或英文縮寫：4-(4-nitnopxenylazo)-1-naphthol，級(jí)別：高純，50%，規(guī)格：5克

MacerozymeR-10 1g/5g/10g/100g原裝 Yakult.JAPAN

Calciumcitratetetrahydrate*5毫克CP

芐基三丁基錄化銨 Bqnzyltributylcmmonium chloridq 3616-79-7

TSTU N,N,N',N'-Tetramethyl-O-(N-succinimidy... 105832-38-0 1G 染色劑
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法*琥珀酸乙酯，英文名或英文縮寫：Erythromycin etxyl succinate，級(jí)別：片段:1000，800，600，400，300，200，100，規(guī)格：100毫克

4484-72-4十二烷基三錄硅烷 ≥95.0% (GC)DODECYLTRICHLOROSILANE

etxyl 4-cyano-5-(metxylsulfanyl)thiopxene-2-carboxylate 116170-84-4

乙二醇丁醚乙酸酯 2-Butoxyethyl acetate,99% 112-07-2