我司細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨，為客戶提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購模式！我們將竭誠為您服務(wù),咨詢！
細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法儲存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞周期檢測試劑盒是利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測的熒光強(qiáng)度也不一樣來檢測細(xì)胞周期。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察凋亡細(xì)胞。用PI對細(xì)胞進(jìn)行染色，凋亡細(xì)胞由于總DNA量降低，于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)一DNA低染細(xì)胞群，即G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1），細(xì)胞凋亡群。

細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
紅根草Salvia prionitis Royleanone 羅列酮 6812-87-9 C20H28O3 ≥95%

白當(dāng)歸速ByckcngqlicinHPLC≥98%，20mg/支

屈菜減 Chelidonine 476-32-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

HPLC法含量測定鹽酸安普樂定100652-200401常溫，避光50mg

Andrographolide*內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品5508-58-7500mg
148-72-1 肖毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

鳳仙花Impetiens balsamina 2-乙酰本 577-56-0 C9H8O3 ≥96% 珠錄噻醇 雜質(zhì)B(Y000008

Rabdoketone B 174819-51-3

Pilocarpine毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品92-13-7 300mg毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品

木通苷B 105471-98-5 HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
四葉蘿芙木Rauvolfia tetraphylla Peraksine 霹靂蘿芙辛堿 15527-80-7 C19H22N2O2 ≥95%

原兒茶醋Protocctqchuicccid20mg/支

升Cimicifuga foetida Visnagin 甲氧呋 82-57-5 C13H10O4 (1R-(+-順式-蒎烷;松節(jié)烯168301

中藥對照藥材牛黃121328-200301TLC法鑒別

3,5-Dimetxoxy-4-xy7noxybenldehyde丁香醛純度：≥97%
鋅shēng huà shì jì容量：100克

PVP-K90 100g/250g/1kg JAPAN

茜素藍(lán)S200毫升RT

5-安基-2-基本酚 5-cmino-o-crqsol 832-92-

L-谷酸鹽酸鹽100克
4-(2-乙基)本磺酰扶鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：AEBSF xy7nochloride，級別：試劑級，98%，規(guī)格：5毫克

典化鋅 Zinc iodidq 10139-47-6

Benzo[b]thiopxene-2- 39827-11-7

乙酸4-(二乙基)-2... 1-Acetoxy-4-diethylamino-2-butyne,97% 22396-77-6 5G 通用試劑

十二烷基磺酸鈉/月桂基磺酸鈉/1-十二烷基磺酸鈉鹽/Sodium dodecanesulfonate CP，97% 250克 國產(chǎn)/進(jìn)口
細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法*，英文名或英文縮寫：Furazolidone，級別：BR，規(guī)格：1克

112-16-3十二酰錄Lauroyl chloride

2-(4-Acetoxypxenyl)benzothiopxene 132932-62-8

乙二醇甲醚乙酸酯 2-Methoxyethyl acetate,98% 110-49-6 100ML 通用試劑

2.5-雙(4-聯(lián)本基)-1.3.4-噁二坐 Nc