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更新時間:2017-07-03 14:22:19瀏覽次數(shù):189次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒50T免費(fèi)代測
細(xì)胞周期檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞周期檢測試劑盒50T售后服務(wù)儲存條件:-20℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
細(xì)胞周期檢測試劑盒是利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料結(jié)合的特性,細(xì)胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同,流式細(xì)胞儀檢測的熒光強(qiáng)度也不一樣來檢測細(xì)胞周期。細(xì)胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核裂解,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期,細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低,對90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,前向角和90°角光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察凋亡細(xì)胞。用PI對細(xì)胞進(jìn)行染色,凋亡細(xì)胞由于總DNA量降低,于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)一DNA低染細(xì)胞群,即G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰(sub-G1),細(xì)胞凋亡群。
細(xì)胞周期檢測試劑盒50T售后服務(wù)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞周期檢測試劑盒50T售后服務(wù)注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
鉤藤Uncaria sessilifructus Rubelloside B none 167875-39-0 C42H66O14 ≥95%
知母皂苷A3Timoscponinc3HPLC≥98%;20mg/支
屈菜紅減;屈菜赤減 Chelerythrine 34316-15-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
中藥對照藥材鹿角(馬鹿)121487-200401TLC法鑒別
metxYLGALLATE 倍酸甲酯純度:>95%
14882-18-9 *標(biāo)準(zhǔn)品 100mg
白蠟樹速Fraxinuselement6032-49-010mg
3,4-Dimetxoxybenzoic acid 3,4-二甲氧基本 34152
Acebutolol xy7nochloride鹽酸醋丁洛爾標(biāo)準(zhǔn)品34381-68-5125mg鹽酸醋丁洛爾標(biāo)準(zhǔn)品
金絲桃素;Hypericin 548-04-9 10mg 訂購|咨詢
25953-19-9 *標(biāo)準(zhǔn)品 150mg
原兒茶醋;3,4-二羥基本醋Protocatechuicacid;3,4-twoxy7noxybenzoicacid99-20-3HPLC≥98%,20mg/支
Junipediol B JUNIPEDIOL B 144881-19-6
水楊酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品636-46-4 100mg水楊酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品
氧化小檗堿 549-21-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鋅5克RT
CTAB 50g/100g/500g/1kg Amresco 0833
明膠蛋白胨shēng huà shì jì容量:RT,避光25克
啊利新皇 GXS clcicn Yqllow 61968-76-1
環(huán)己烯;1,2,3,4-四輕化本 Cyclohqxqnq 110-83-8
4-(2-乙基)本磺酰錄100克RT
2447-57-6周效磺胺;*Sulfadoxine
3-BOC-aminopxenylboronic acid, pinacol ester 330793-09-4
3-(*基硅烷基)炔... 3-(Trimethylsilyl)propargyl bromide 38002-45-8 1G 多肽試劑
V-J瓊脂shēng huà shì jì容量:100克
細(xì)胞周期檢測試劑盒50T售后服務(wù)小鼠細(xì)胞分離液500克
109-69-3錄代正丁烷1-Chlorobutane
嶙鎢酸鈉100毫克保存:-20℃
乙二醇二甲醚 Ethylene glycol dimethyl ,99.5% 110-71-4 100ML 通用試劑
?;侨パ跄懰徕c/?;敲撗跄懰徕c/Sodium taurodeoxycholat ACS,95% 1克 國產(chǎn)/進(jìn)口
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