當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氮代謝系列>> 亞硝酸還原酶(NiR)微量法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6480 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/48樣 |
檢測方法 | 微量法 |
貨號 | GOY-01S6480 |
商品介紹:
測定意義
硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。
測定原理
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體Human MAML3 ELISA Kit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)ELISA試劑盒,
化芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移抗體Human MAN2B2 ELISA Kit小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒,
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human MAN1A2 ELISA Kit抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體Human MANBAL ELISA Kit百日咳素(PT)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體Human MANSC1 ELISA Kit血吸蟲(schistosoma)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體Human MANEA ELISA Kit輪狀病抗原(RV Ag)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
激活素受體相互作用蛋白1抗體Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
固酮類還原家族7成員A2抗體Human MAP4K2 ELISA Kit小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒,
亞硝酸還原酶(NiR)微量法檢測試劑盒三吡咯烷溴化鏻六氟鹽 98%小鼠性β葡萄糖苷(GBA)免疫試劑盒淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體Thy-1/CD90/ Thy1.1 CD90抗體
2-溴-1,3,5-三異 96.0 %小鼠絲裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)免疫試劑盒淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體THSD1 血小板跨膜反應(yīng)蛋白1抗體
6-并三氮唑-1,1,3,3-四脲六氟酯 98% 小鼠絲氨轉(zhuǎn)肽抑制劑Kazal type 3(SPINK3)免疫試劑盒轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體THRSP 狀反應(yīng)蛋白抗體
2--1,3-二咪唑鎓四氟鹽 98%小鼠水通道蛋白9(AQP-9)免疫試劑盒卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體Thrombospondin 2 血小板反應(yīng)蛋白2/敏感蛋白2抗體
6--1-羥并三氮唑 98%小鼠水通道蛋白5(AQP-5)免疫試劑盒錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體Thrombomodulin/CD141 血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體
1-(-1-吡咯烷亞)吡咯烷六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白4(AQP-4)免疫試劑盒載脂蛋白C3抗體thrombin II Ⅱ(II)抗體
2--1,3-二化咪唑鎓 90%小鼠水通道蛋白3(AQP-3)免疫試劑盒凋亡增強(qiáng)核抗體Thrap3/TRAP150 狀受體相關(guān)蛋白3抗體
代二哌碳鎓六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白2(AQP-2)免疫試劑盒染色體脆弱性相關(guān)因抗體THRA1+2 狀受體α1+α2抗體
代三吡咯烷鏻六氟鹽 98%小鼠水通道蛋白1(AQP-1)免疫試劑盒化蛋白激B抗體THRA1 狀受體α1抗體
多肽試劑TCTU 98%小鼠水通道蛋白0(AQP-0)免疫試劑盒銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體THOC2 轉(zhuǎn)錄因子THOC2抗體
2--1,3-二咪唑六氟鹽 98%小鼠雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒酰輔A合成家族4抗體Thioster-containing protein 1 按蚊硫酯包含蛋白-1抗體
3-(二乙氧酰氧)-1,2,3-并三-4-酮 98% 小鼠瘦素(LEP)免疫試劑盒性樣蛋白2抗體Thioredoxin 2 線粒體硫氧還蛋白2抗體
代二乙酯 純度 ≥90%小鼠嗜性粒陽離子蛋白(ECP)免疫試劑盒AHNAK核蛋白2抗體Thioredoxin 硫氧還蛋白抗體
2-(2-吡酮-1-)-1,1,3,3-四脲四氟鹽 99%小鼠嗜性粒過氧化物(EPO)免疫試劑盒二腺苷核糖化因子6相互作用蛋白抗體THAP1 核凋亡因子THAP1抗體
N,N'-二環(huán)己碳二亞 99.0%小鼠嗜粒趨化因子(ECF)免疫試劑盒p53誘導(dǎo)蛋白5抗體TH/T-H glycoprotein TH糖蛋白抗體
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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