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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 超氧陰離子清除能力可見分光光度法
貨號(hào) | GOY-01S6461 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
50管/48樣 | 可見分光光度法 | GOY-01S6461 |
商品介紹
測(cè)定意義 超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 測(cè)定原理: AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體Human RPS19(Ribosomal protein S19) ELISA Kit
白介素17受體C抗體Human RPS20 ELISA Kit
球蛋超家族成員8抗體Human RPP21 ELISA Kit松塔
白介素33抗體Human RPLP0 ELISA Kit肉桂
核蛋白9抗體(Ran結(jié)合蛋白M)Human RPP38 ELISA Kit亞鈣
真核翻譯起始因子3A抗體Human RPP25 ELISA Kit雜質(zhì)A(2-甲基-4(5)-硝基咪唑
化真核翻譯起始因子4G抗體Human RPRD1B ELISA Kit
整合素α4β7抗體Human RPL7L1 ELISA Kit雙硫化物
超氧陰離子清除能力可見分光光度法氧化鈣 99.99% metals basisAnti-Integrin Alpha2b/CD41/FITC 熒光素標(biāo)記血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體IgG雞中心體蛋白110(CEP110)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
硫化鎘 CP,95%Anti-Integrin Alpha3/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α3抗體IgG雞生長(zhǎng)分化因子2(GDF2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
硫化鎘 AR,98%Anti-Integrin Alpha3 Beta1/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α3β1抗體IgG雞神經(jīng)鈣黏蛋白(NCAD)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
硫化鎘 99.999%Anti-Integrin a7/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α7抗體IgG雞δ樣蛋白1同源物(DLK-1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
化鈰,無水 99.9% (REO)Anti-Integrin AlphaE2/CD103 /FITC 熒光素標(biāo)記整合素αE2抗體IgG雞干因子(SCF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銅粒 99.99% metals basis,粒徑<5mmanti-Integrin alpha E2 /FITC 熒光素標(biāo)記整合素alpha E2 抗體IgG雞受體(TR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銅粉 99.8% metals basis,20μmAnti-Integrin AlphaM/CD11b /FITC 熒光素標(biāo)記巨噬表面分子/整合素-α2抗體IgG雞鈣腔蛋白(CALU)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
硝銫 99.99%Anti-Integrin avb3/FITC 熒光素標(biāo)記整合素avb3抗體IgG雞二肽肽IV (DPP4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
硝銫 AR,99.0%Anti-Integrin AlphaV Beta5/FITC 熒光素標(biāo)記整合素αVβ5抗體IgG雞超氧化物歧化1(SOD1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 99.9% metals basis,黃色Anti-Integrin Beta5/FITC 熒光素標(biāo)記整合素β5抗體IgG雞α1-B-糖蛋白(α1BG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 20nm 球形,99.5%Anti-IQGAP1/FITC 熒光素標(biāo)記支架蛋白抗體IgG雞尿嘧核苷化2(UPP2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 99.95% metals basis ,白色Anti-Phospho-IRAK1 (Ser376) /FITC 熒光素標(biāo)記化白介素-1受體相關(guān)激1抗體IgG雞胎球蛋白A(FETUA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 99.95% metals basis,<50 nm (BET)Anti-Phospho-IRAK1 (Thr209) /FITC 熒光素標(biāo)記化白介素-1受體相關(guān)激1抗體IgG雞脂A1(PLA1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 99.9% metals basis,<100 nm (BET)Anti-Phospho-IRAK1 (Thr387) /FITC 熒光素標(biāo)記化白介素-1受體相關(guān)激1抗體IgG雞抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氧化鈰 99.99%Anti-IRAK 2/FITC 熒光素標(biāo)記白介素-1受體相關(guān)激2抗體IgG雞核轉(zhuǎn)錄因子Y亞γ(NFYC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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