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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 丙二醛(MDA)可見分光光度法檢測試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6414 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6414 |
商品介紹:
測定意義
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。
測定原理:
MDA與硫代酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm有最大吸收峰,進(jìn)行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時(shí)測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
5-己炔-1- 96%對(duì)甲酸 CP,98%IL-2 (Interleukin-2)Human IL-2抗原(人)
6-庚炔酸 97%對(duì)甲酸 AR,99%IL-23(Interleukin-23) 白介素-23抗原
4-羥酸 97%6-正基-2-硫代尿嘧 98%IL-4(Interleukin-4) 白介素4抗原
2-羥基-4-甲基吡 98%1,1-環(huán)已基二乙酸單酰 99%IL-4(Interleukin-4)human peptide 白介素4抗原
4-羥基-3-硝基吡 98%1,1-環(huán)己基二乙酸酐 98%IL-5 peptide 白介素5抗原
1-庚炔-3- 97%3,4-二甲氧基苯甲酸 99%IL-6 (Interleukin-6) Human 白介素6
3-吡 98%2,5-二甲氧基苯甲 98%IL-7(Interleukin-7) 白介素7抗原
1--2-硅基乙炔 97%2,5-二甲氧基-β-乙烯 98%IL-6R Alpha (IL6R-alpha) 白介素6受體α抗原
丙二醛(MDA)可見分光光度法檢測試劑盒2,6-二硝 98%IL-15 ELISA KIT 大鼠白介素15豚鼠脂蛋白關(guān)聯(lián)脂A2(LpPLA2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
溴化鋅 99.999% metals basisIL-16 ELISA KIT 大鼠白介素16豚鼠胰蛋白原激活肽(TAP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
化鋅IL-17 ELISA KIT 大鼠白介素17豚鼠酮脫氫E1(PDH E1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
殺草強(qiáng) 分析標(biāo)準(zhǔn)品IL-1sR I ELISA Kit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ豚鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG-1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-氨-1,2,4-三唑 96%sE-selectin ELISA Kit 大鼠可溶性E選擇素豚鼠P62抗體(AP62A)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-氨-4H-1,2,4-三唑 98%IL-1sR II ELISA Kit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ豚鼠熱休克蛋白40(HSP-40)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
吩 98%17-OHCS ELISA Kit 大鼠17羥皮質(zhì)類固豚鼠二氫硫辛脫氫(DLD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
對(duì)羥 CPNAG ELISA Kit 大鼠N-乙酰-β-D-氨葡萄糖苷豚鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
對(duì)羥 AR,99.0%17-KS ELISA Kit 大鼠17-酮類固豚鼠谷氨脫氫(GDH/GLDH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
吩噻 98%IL-2sR Alpha/CD25 ELISA Kit 大鼠白介素2可溶性受體α鏈豚鼠類粘蛋白2(ORM2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
吩噻 分析標(biāo)準(zhǔn)品IL-2sR Beta ELISA Kit 大鼠白介素2可溶性受體β鏈豚鼠二氫嘧脫氫(DPYD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
無水哌 99%IL-3 ELISA Kit 大鼠白介素3豚鼠載脂蛋白C4(ApoC4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
哌 六水合物 98%IL-5 ELISA Kit 大鼠白介素5豚鼠尿苷二葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖轉(zhuǎn)移(UGCG)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
哌,六水 分析標(biāo)準(zhǔn)品LR/Ob-R ELISA Kit 大鼠苗條素受體豚鼠視黃結(jié)合蛋白4(RBP4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
碳化硅 99.9% metals basisLEP ELISA kit 大鼠瘦素豚鼠補(bǔ)體因子B(CFB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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