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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 非蛋白質(zhì)巰基微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6462 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 微量法 |
貨號(hào) | GOY-01S6462 |
商品介紹:
測(cè)定意義
生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能,對(duì)生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。
測(cè)定原理:
巰基基團(tuán)與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在412nm處有最大吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品:
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿和蒸餾水,甲醇。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
硝酸銅,三水 99.99% metals basis鄰苯二甲酸二正壬酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 136.0μg/mL,溶劑:甲5-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit 小鼠5核苷酸
硝酸銅,三水 ACS,98.0-102.0%p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液 49.9μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD19(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD19分子
硝酸銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L(0.05M)p, p’-DDE標(biāo)準(zhǔn)溶液 50.0μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD3(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD3分子
碳酸鈣 AR,99%p, p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 50.0μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD4(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD4分子
碳酸鈣 99.99% metals basis敵草快標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 99.9%CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD8分子
碳酸鈣 用于昆蟲培養(yǎng),99%己標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 99.7%CD25(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD25分子
碳酸鈣 99.999% metals basis鮭魚精DNA成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 2.050mg/gCD20(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD20分子
四氯化碳 Standard for GC, ≥99.9% (GC) 鮭魚精DNA成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 2.050mg/gCD14(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD14分子
非蛋白質(zhì)巰基微量法檢測(cè)試劑盒3,4-二氟 98%人抗底節(jié)(BG)自身抗體免疫試劑盒緊密連接蛋白19抗體phospho-KLF5(Ser311) 化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體
2,3-二氟 98%人抗肌內(nèi)膜抗體(EMA)(IgA)免疫試劑盒緊密連接蛋白18抗體phospho-KLF5(Ser275) 化KLF5抗體
3,5-二氟 97%人抗肌內(nèi)膜(EMA)抗體(IgG)免疫試劑盒緊密連接蛋白17抗體phospho-KLF5(Ser272) 化KLF5抗體
1,4-環(huán)己二酮單乙二縮酮 98%人抗肌集鈣蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒緊密連接蛋白16抗體phospho-Kidins220 (Ser918) 化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體
1,4-二 98%人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)免疫試劑盒CELF3蛋白抗體phospho-KCND2/Kv4.2(Thr607) 化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體
2,3-二氟 97%人抗黃體生成素抗體(Anti LH Ab)免疫試劑盒鈣粘蛋白超家族CELSR1抗體phospho-KCND2/Kv4.2(Thr602) 化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體
3,4-二氟 97%人抗環(huán)胍氨肽(CCP)抗體免疫試劑盒牙骨質(zhì)蛋白1抗體phospho-KCNC1(Ser503) 化離子通道蛋白Kv3.1抗體
對(duì)乙 97%人抗琥珀脫氫黃素亞單位抗體(IgG)免疫試劑盒CENPBD1蛋白抗體phospho-JUP(Tyr550) 化γ連環(huán)蛋白抗體
4-乙氧乙酮 98%人抗呼吸道合胞病抗體(RSV IgM)免疫試劑盒著絲粒蛋白I抗體phospho-JunD(Ser255) 化活化蛋白激D抗體
4-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗體免疫試劑盒著絲粒蛋白J抗體phospho-JunB(Ser79) 化活化蛋白激B抗體
3-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗體(IgG)免疫試劑盒著絲粒蛋白L抗體phospho-JunB(Ser259) 化活化蛋白激B抗體
4-乙聯(lián) 97%人抗紅抗體(RBC)免疫試劑盒著絲粒蛋白M抗體Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 化活化蛋白激B抗體
4-乙環(huán)己酮 98%人抗核周因子(APF)抗體免疫試劑盒著絲粒蛋白N抗體phospho-JNK1/2/3(Thr183+Thr185) 化氨末端激1/2/3抗體
4-乙乙炔 98%人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)免疫試劑盒著絲粒蛋白Q抗體Phospho-Jak3 (Tyr980/981) 化蛋白酪氨激JAK-3抗體
4-戊乙炔 97%人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)免疫試劑盒CENTB2蛋白抗體Phospho-Jak3 (Tyr785) 化蛋白酪氨激JAK-3抗體
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
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