實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
公司采用的全是進口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強,無效包退包換,公司提供免費代測服務,各種種屬ELISA試劑盒產品齊全,質量可靠。
產品名稱 | 魚紅細胞生成素(EPO)elisa試劑盒 |
英文名稱 | Fish erythropoietin,EPO ELISA kit |
貨號 | GOY-F74840 |
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樣品收集、處理及保存:
1).細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3)血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4)血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37℃暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在450 nm處測吸光值。
三氧化二鉻(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb溴-2-硝基三氟
四氧化三鈷(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb甲酸酯
酸鈷四水(>99.5%,BR)UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb甲酰-2-酸酯
鈷粉(>99%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb氧基甲酸
銅粉(>99.5%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-磺酰
式碳酸銅(銅純度:52.5~56.5%)LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-氟
氧化銅粉(>99%,BR)LSm2 (D9X6C) Rabbit mAb十二烷基噻吩
焦銅iNOS (D6B6S) Rabbit mAb2,二羥基-甲
銅三水(>98%,BR)Phospho-SQSTM1/p62 (Thr269/Ser272) Antibody5-溴-甲基-1H-吲唑
2'-脫氧腺苷5'二酸三鈉鹽(>97%,BR)PFKFB3 (D7H4Q) Rabbit mAb酰基-7(1H)-氮雜吲哚
2'-脫氧胞苷-5'-二酸三鈉鹽(分子生物學級)PathScan® Phospho-HER4/ErbB4 (panTyr) Sandwich ELISA Kit2-溴-1,二-5-氟
(>98%,BR)IFITM1 Antibody酸
DMPPathScan® Total HIF-1α Sandwich ELISA Kit8-硝基喹啉
沒食子酸月桂酯(>98.5%,BR)Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb氨基-5-三氟甲
dUMP;2'-脫氧尿苷-5'-酸二鈉鹽MT1-MMP (D1E4) Rabbit mAb2-溴-6-并噻唑
鹽酸鹽(>98%,BR)MMP-2 (D8N9Y) Rabbit mAb1-己基-2,二甲基咪唑三氟甲磺酸鹽
呋喃三二鈉鹽TRF2 (D1Y5D) Rabbit mAb芐基二膦
吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)SignalSilence® IRF-7 siRNA I5-溴-2-甲氧基甲
魚紅細胞生成素(EPO)elisa試劑盒5(6)-羧基熒光素 95%原癌基因2抗體血液乙酰膽堿酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒偶氮二甲酸二異酯 95%巖白菜素5(6)-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 96%賴氨酰氧化酶樣蛋白4抗體血液乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒溴化鎂(六水) 98%木栓6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 90%乳鐵蛋白抗體血液異戊二焦磷酸異構酶(isopentenyl pyrophosphate isomerase)活性比色法定量檢測試劑盒4-甲磺酰異酸酯 96%蓮心堿高酸鹽5- 羧基熒光素二乙酸酯 95%層粘連蛋白1+2抗體血液游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒碳酸二酯 99%1-羥基-3,4,5-*氧基山異硫酸熒光素(異構體I) 90%富含亮氨酸重復蛋白15抗體血液游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒硫代乙酸銨 試劑級,70%溶液相思子堿異硫酸熒光素 96%受體蛋白酪氨酸磷酸酶F抗體血液游離膽固酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒叔丁基異硫酸酯 99%柳穿魚黃素二乙酸熒光素 97%磷酸化5-脂氧合酶抗體血液游離膽固酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測試劑盒巰基乙酸乙酯 98%絡石苷3-甲 99%低分子質量蛋白2抗體血液誘導型巨噬細胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量檢測試劑盒3-巰基酸 98%荊芥
操作步驟:
1)運用前,將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫,防止加樣時參加很多的氣泡,發(fā)生加樣上的差錯。
2)依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個規(guī)范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據(jù)自個的數(shù)量來定,能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內。
3)參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,悄悄振動混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
5)每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
7)每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8)取出酶標板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應當即測定成果。
9)在450nm波利益測定各孔的OD值。