特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 分類(lèi) | 貨號(hào) |
枯草芽孢桿菌核酸檢測(cè)試劑盒 | 恒溫?zé)晒夥?/span> | FS-P10776 |
PCR技術(shù)的定量原理:
?
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn),即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
-1613℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
青霉培養(yǎng)基: 0015產(chǎn)生果膠酶提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
ivcas7.00840培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no種屬: Paenibacillus│polymyxa提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28-32℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
麥根腐平臍蠕孢生長(zhǎng)條件: 18-22℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no
枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0050α-淀粉酶。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
食油假單胞菌培養(yǎng)基: 820模式菌株: no沙土提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 29℃ 真空冷凍干燥法
玫瑰變色菌培養(yǎng)基: 471潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自多環(huán)芳烴(PAHs)富集菌群水樣/深海底層水樣提供形式: 凍干物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-1614℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
AS3.4302培養(yǎng)基: Czapek's 瓊脂:蔗糖 30.0 g,NaNO3 3.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,KCl 0.5 g,FeSO4·4H2O 0.01 g,K2HPO4 1.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 6.0-6.5,121℃,15min。121℃,15min。耐21%CuSO4種屬: Penicillium ochrochloron安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-26℃,好氧
ivcas7.00114模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Lysinibacillus│sphaericus土壤提供形式: 凍干物殺蟲(chóng)范圍: 庫(kù)蚊培養(yǎng)基: 0002
多殺性巴氏桿菌研究模式菌株: no不清楚提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37
艾比嗜鹽堿紅菌基礎(chǔ)理論及應(yīng)用研究模式菌株: no鹵水及底泥提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0926生長(zhǎng)條件: 37℃
ivcas7.00721模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Bacillus│thuringiensis土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃
黑木耳生長(zhǎng)條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法
-1615℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
多主葡萄殼菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no蘋(píng)果果實(shí)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25 定期移植法
鹽多奈哌齊III型(標(biāo)準(zhǔn)品)SHP2 peptide 蛋白酪氨磷酶2抗原TBL1Y 轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體
達(dá)馬莫德SIP1 peptide 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗原TBL1X 轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖蛋白抗體
鹽多佐胺;鹽杜塞酰胺SIRT1(sirtuin 1) 沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗原TBCD4/TBC1D4 TBC結(jié)構(gòu)域TBCD4蛋白抗體
鹽多佐胺;鹽杜塞酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Skp2 peptide S相激酶相關(guān)蛋白抗原TBCD/Beta tubulin cofactor D 微管蛋白β輔助因子D抗體
甲磺多沙唑SLC4A4(solute carrier family 4:sodium bicarbonate cotransporter NBC1) 碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4Tau protein 微管相關(guān)蛋白抗體
甲磺多沙唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Slc4a7/Nbcn1(solute carrier family 4, sodium bicarbonate cotransporter, member 7) 碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A7抗原Tau protein 微管相關(guān)蛋白抗體
鹽多柔比星/鹽阿霉素Smac/DIABLO(the second mitochondrial activator of caspase) 線(xiàn)粒體促凋亡蛋白抗原Tat 酪氨轉(zhuǎn)氨酶抗體
鹽多柔比星/鹽阿霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)SLC33A1(Acetyl-coenzyme A transportor 1) 乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗原TASK 3/KCNK9 敏感性離子通道蛋白抗體
鹽強(qiáng)力霉素/鹽多西環(huán)素SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2) 磷鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原TAS2R7/T2R6 味覺(jué)感受器蛋白T2R6抗體
鹽強(qiáng)力霉素/鹽多西環(huán)素(標(biāo)準(zhǔn)品)SMN1(survival of motor neuron 1) 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1抗原TAPA1/CD81 CD81抗體
枯草芽孢桿菌核酸檢測(cè)試劑盒Diosmetin 香葉木素(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Cytisine 金雀花,野靛 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Cytisine 金雀花,野靛(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Irbesartan 厄貝沙坦 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
5'-O-(4,4'-Dimethoxytrityl)-thymidine-3'-O-succinicacid 5'-O-(4,4'-二甲氧基三基甲基)-胸苷-3'-O-丁二 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
D-(−)-Salicin 水楊苷 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
D-(−)-Salicin 水楊苷(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Magnolol 厚樸酚 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Magnolol 厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Esomeprazolemagnesiumtrihydrate 埃索美拉唑鎂(三水) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Rutin 蘆丁/蕓香葉苷 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Rutin 蘆丁/蕓香葉苷(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Neosperidindihydrochalcone 新橙皮苷二氫查爾 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Neosperidindihydrochalcone 新橙皮苷二氫查爾(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Oxymatrine 氧化苦參 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR