參數(shù)規(guī)格:
產品名稱:對蝦桃拉病毒(TSV)核酸定性檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
產品貨號:FS-P10674
產品分類:RT-PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
血痕韌革菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no基質提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
克氏假單胞菌近海細菌模式菌株: no土壤/椰子樹腐爛芯覆土提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種培養(yǎng)基: 0002產生較大晶體;殺蟲提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-1042℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
曲霉屬培養(yǎng)基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥
金龜子綠僵菌生物防治模式菌株: no松墨天牛幼蟲提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 25
ATCC56765=NRRL11460=NRCC2906種屬: Trichoderma reesei安全等級: 1模式菌株: yes
香菇培養(yǎng)基: 0014食用、藥用提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;礦物油法;定期移植法
鏈霉菌 -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;礦物油法生長條件: 28℃提供形式: 凍干物模式菌株: yes培養(yǎng)基: 38
海桿菌大洋細菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 4℃
-1043℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
苦蘑培養(yǎng)基: 14模式菌株: no菌體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
膠孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no北京楊提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
正青霉屬抗真菌;抗白色念珠菌模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0018生長條件: 26C
壺黑蛋巢生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法;定期移植法;其他
大腸埃希菌科研及血清定型模式菌株: no腹瀉犢牛糞便提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37
6-乙酯
谷維素
4-(基)-1H-咪唑
乙?;阴籽趸?/font>
2-Bromo-4-butanolide α-溴-γ-丁內酯 5061-21-2
Chloromethyl chlorosulfate 甲基磺酯 49715-04-0
DIMETHYL 2,6-PYRIDINEDICARBOXYLATE 2,6-二二甲酯 5453-67-8
Isocyanatocyclohexane 環(huán)己基異酯 3173-53-3
大鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(AIL-R3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒 Human Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit
人抗鈣調素特異抗體(CAM-ab)ELISA試劑盒 ,英文名: CAM-ab ELISA Kit
RatIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGlucoseanspoer1,GL1ELISA試劑盒人葡萄糖轉運蛋白1(GL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanIerleukin-2receptor,IL-2RELISAKit人白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
對蝦桃拉病毒(TSV)核酸定性檢測試劑盒芹菜苷26544-34-3中文別名:芹黃苷;芹菜甙
英文名:Apioside
英文別名:7-[(2-O-D-apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one
登錄號:26544-34-3
分子式:C26H28O14
分子量:564.49
分子結構:
外觀:黃色結晶
規(guī)格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:傘形科草本植物芹菜 (Apium graveolens L. )
溶解性:可溶于、DMSO 等溶劑,不溶于等溶劑。
熔點:211-214°C
藥理藥效:抗氧化 抗衰老 抑制高血壓 高血脂及預防心血管疾病。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。