產品介紹:
茜素紅S染色試劑中的茜素紅S可通過與鈣離子和其他金屬離子發(fā)生鰲和反應而形成可以在顯微鏡下直接觀察的帶顏色的復合物。本產品就是基于此原理而開發(fā)。 產品特點: 1.即開即用,用戶不需要單獨準備各種溶液。 2.操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。 3.可用于組織切片中的鈣沉積,尤其適用于骨細胞或組織的病理和生理研究。 4.可用于檢測動物原生代或培養(yǎng)細胞的鈣沉積。 5.本產品為通用型,不但用于鈣離子的檢測,還可用于FeCl2和CdCl2的檢測。 儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。 |
中文名稱:茜素紅S染色試劑盒
英文名稱:Alizarin Red S Staining Kit
產品規(guī)格:100mL
貨號:FS-X9758
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
血小板反應蛋白(THBS1)英文名:THBS1 色CYP3A抗體包裝25g
血栓調節(jié)蛋白(TM)英文名:TM 色cP450 CYP20A1抗體包裝5g
血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)英文名:SAA2 色cP4501B1抗體包裝1g
血清淀粉樣P物質(SAP)英文名:SAP 色cP450 CYP26A1抗體包裝5g
血紅氧合2(HO2)英文名:HO2 磷化周期E抗體包裝100mg
血紅氧合1(HO1)英文名:HO1 磷化周期E2抗體包裝5g
血紅蛋白(HB)英文名:HB 周期M3抗體包裝1g
血管抑(ANG)英文名:ANG 周期Y/X抗體包裝250mg
血管性血友病因子(vWF)英文名:vWF 磷化周期D3抗體包裝1g
血管細胞粘附分子1(VCAM1)英文名:VCAM1 色b5還原3抗體包裝1g
血管生成樣蛋白7(ANGPTL7)英文名:ANGPTL7 CWC22蛋白抗體包裝250mg
血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)英文名:ANGPTL3 9號染色體開放閱讀框95抗體包裝5g
血管生成樣蛋白2(ANGPTL2)英文名:ANGPTL2 19號染色體開放閱讀框67抗體包裝10MG
血管生成樣蛋白1(ANGPTL1)英文名:ANGPTL1 磷化酪蛋白激1γ1+γ2+γ3抗體包裝100ml
血管生成4(ANGPT4)英文名:ANGPT4 原卟啉氧化3抗體包裝25ml
ADP核糖基化因子結合蛋白抗體泛交叉反應蛋白(UCRP)N/A
茜素紅S染色試劑盒細鏈格孢 檸檬二鈉鹽絲裂原活化蛋白激4
暗擬莖點霉(可訂購) 檸檬哌水合物絲裂原激活的蛋白激;MAP激
產卟啉桿 9,9'-螺二芴斯鈣1
產黑鏈霉 2-溴-4,5-二氟斯鈣2
針葉樹散斑殼 4-咪唑死亡受體3
球孢白僵 3,4-二氟死亡受體5
葡萄座腔 4,5-二咪唑四氫生物蝶呤
稻生黃單胞 4,4-二氟鹽鹽松弛H2
球孢白僵 (1R,2S)-1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基環(huán)烷甲松弛肽;松弛
強壯根瘤 2-溴-6-氟吡啶性成纖維生長因子
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) 3-吡啶基偕肟性成纖維生長因子1
日本色鹽桿 2--1-嗎琳乙-1-酮髓過氧化物
運動節(jié)桿 乙酰乙乙酯鈉鹽髓過氧化物特異性抗中性粒胞質
腐皮鐮孢 三(2,4-戊二酮)銦(III)髓鞘堿性蛋白
新鞘氨 4-氨基-2--5-甲基嘧啶髓鞘堿性蛋白抗體