產(chǎn)品介紹:
Rhodamine 123染色液可用于細(xì)胞凋亡檢測,Rhodamine 123 是一種細(xì)胞通透性的、陽離子的熒光探針,容易被有活性的線粒體攝取,沒有細(xì)胞毒性,Rhodamine 123由于帶陽離子所以當(dāng)線粒體膜電位存在的時候就會透過細(xì)胞膜在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集,發(fā)出黃綠色熒光,而當(dāng)膜電位下降的時候,聚集的Rhodamine 123 就減少,從而發(fā)光強(qiáng)度降低。 Rhodamine 123 常與Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等組合進(jìn)行多色熒光分析,相互間無顏色交叉;分析細(xì)胞凋亡時,可用Rhodamine 123 來檢測線粒體的膜電位,而用NAO 來檢測線粒體結(jié)構(gòu)的完整性。Rhodamine 123,可用于對許多種細(xì)胞進(jìn)行染色,包括植物細(xì)胞和細(xì)菌。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與Rhodamine 123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性,Rhodamine也可應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。 儲存條件:4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。 有效期:六個月。 |
中文名稱:Rhodamine 123染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號:FS-X9837
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
英文名: Cyclosporine A磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
拓?fù)涮婵蝶}鹽英文名: Ticlopidine HCl磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
維酰酚英文名: Ticlopidine HCl胸腺基質(zhì)淋巴生成受體抗體包裝25g
維羅非尼,RG7204英文名: Cytarabine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝5g
戊柔比星英文名: Cytarabine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
西地尼布;AZD2171英文名: Cytarabine蛋白磷激PKC/CPI-17抗體包裝5g
西地尼布馬來鹽英文名: Dacarbazine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
亞葉鈣英文名: Dacarbazine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
鹽阿糖胞英文名: Dasatinib胰輔脂抗體包裝5g
鹽埃羅替尼英文名: Dasatinib19號染色體開放閱讀框45抗體包裝5MG
鹽昂丹司瓊英文名: Daptomycin過氧化氫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體包裝5MG
鹽達(dá)莫司汀英文名: Daptomycin核因子NFκB激活蛋白1抗體包裝100g
鹽表阿霉英文名: Daunorubicin HCl第12號染色體開放閱讀框23抗體包裝25g
鹽/鹽阿霉英文名: Daunorubicin HClγ-連環(huán)/連接蛋白γ抗體包裝5g
鹽英文名: Daunorubicin HCl10號染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測定胰島受體底物2試劑盒鹽拓?fù)涮婵?Topotecan hyd
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%胰島受體底物1試劑盒延齡草;Diosgenin gluco
小珊瑚球菌Corallococcus│exiguus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島受體β試劑盒異槲皮;Isoquercitrin
Rhodamine 123染色液山羊葡萄球 新生牛血清500ml/XQ-A0500磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-2
克魯斯假絲酵母 新生牛血清100ml/XQ-A0100磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-7
泡盛曲霉 新生牛血清50ml/XQ-A0050核糖基轉(zhuǎn)移1
薄層 穩(wěn)定劑,500ml裝/CT-0500脂聯(lián)β樣1
釀酒酵母 穩(wěn)定劑,200ml裝/CT-0200胰島抗體
穩(wěn)定劑,50ml裝/CT-0050神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4
仙芝(靈芝屬之一種) 穩(wěn)定劑,10ml裝/CT-0010血管緊張轉(zhuǎn)化1
香菇 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-050血管緊張轉(zhuǎn)化1
嗜鹽細(xì)屬 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-010流行性出血熱IgG抗體
短小克銀漢霉 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-00115-deoxy-前列腺J2
傷門氏 粘附液/301-026-015抗能受體M2抗體
干草鞘氨單胞 粘附液/301-025-015CD64分子
黃桿 蛋白膠染液 /300-692-1000磷乙磷
假單胞屬 蛋白膠染液 /300-692-500p38絲裂原活化蛋白激
天青鏈霉 AquaSafe 安全保鮮劑/22-100-01神經(jīng)肽S