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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存

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更新時間:2017-07-17 12:53:45瀏覽次數(shù):285次

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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存一般使用0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存詳細說明書:

微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37
反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
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HumanLegionellaantibodyIgM,LPAb-IgMELISAKit人軍團菌抗體IgM(LPAb-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISAKit 11去輕血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanapoproteinA5,apo-A5ELISA試劑盒人載脂蛋白A5(apo-A5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

植物葉綠體外膜脂質(zhì)薄層色譜(TLC)分析檢測試劑盒10

HumanT-lymphotropicvirus,HTLV-ELISAKit人類嗜T淋巴細胞Ⅰ型病毒(HTLV-)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
13S-HODE-biotin 100 ug     13S-xy7noxy-9Z11E-octadecadiene-2-biotinylhydrazide; 13S-HODE-biotin

RHC-80267 10 mg     U-57908 1,1-[O,O-[1,6-hexanediylbisiminocarbonyl]dioxime]

鬼筆環(huán)肽-iFluor 350偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 350 Conjugate

Butylone-d3 xy7nochloride 500 ug     1-1,3-benzodioxol-5-yl-2-metxyl-d3-amino-1-butenone, monoxy7nochloride; β-keto MBDB-d3; Butylone-d3 xy7nochloride

Oleic Acid 10 g     9Z-Octadecenoic acid Oleic Acid

4a-     Pseudolaric Acid B
HCV Core Protein (19-25)Pro-Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro

β-Amyloid (35-25)Met-Leu-Gly-Ile-Ile-Ala-Gly-Lys-Asn-Ser-Gly

[Pyr11]-Amyloid β-Protein (11-40)Pyr-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val

BombesinPyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2

PAR-1(1-6) (mouse, rat)Ser-Phe-Phe-Leu-Arg-Asn
微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL保存環(huán)己醇CyclohexanolCP500mL

SH85000透析袋夾子 8cm8cm0

C0182-5gCytidine 胞嘧啶核苷65-46-35g

Marker III250ul*5

L-亮安酸25g

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