當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標(biāo)記及檢測產(chǎn)品>> 定影粉1袋特點
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更新時間:2017-07-17 12:49:42瀏覽次數(shù):239次
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定影粉1袋特點使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
定影粉1袋特點確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
定影粉1袋特點步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒 ,英文名: FE3 ELISA Kit
人抗核周因子抗體(APF)ELISA檢測試劑盒Humananti-perinuclearfactor,APFELISAKit 96T/48T
大鼠白介素16(IL-16)免疫試劑盒 Rat Interleukin 16,IL-16 ELISA KIT
CLIAKitforTBA(HumanTotalbileacide)ELISAKit人總膽汁酸規(guī)格:48T/96T
人體hTERT基因甲基化檢測試劑盒20次
ELISAKitRBC人抗紅細胞抗體規(guī)格:48T/96T
小鼠存活素(Surv)ELISA試劑盒 ,英文名: Surv ELISA Kit
人血紅蛋白C(HbC)ELISA檢測試劑盒HumanHemoglobinC,HbCELISAKit 96T/48T
大鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒 Rat Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit
英文名稱RatCystatinCELISAKit大鼠胱抑素C(CysC)規(guī)格:96T/48T
酵母菌*補充混合(CSM-HOPKINS)培養(yǎng)基100毫升
ELISAKitMBP人髓磷脂堿性蛋白規(guī)格:48T/96T
小鼠肝表達趨化因子(LEC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat endotoxin (ET) ELISA Kit 大鼠內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒
HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-typhusantibodyELISA試劑盒人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次
HumanToxoplasmaGondii,T.gondiiELISAKit人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
13(R)-HODE cholesteryl ester (25 ug) 13R-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 13(R)-HODE cholesteryl ester
LAQ824 (10 mg) Dacinostat|NVP-LAQ824; (2E)-N-xy7noxy-3-[4-[[(2-xy7noxyetxyl)[2-(1H-indol-3-yl)etxyl]amino]metxyl]pxenyl]-2-propenamide
Cal-520, 鈉鹽 Cal-520, wo7ium salt
Levetiracetam (10 mg) (αS)-etxyl-2-oxo-1-pyrrolidineacetamide; UCB-L 059|Kea ; Levetiracetam
Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester (50 mg) 8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid, etxyl ester; etxyl DGLA; Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester
3-Decanone, 5-xy7noxy-1-(4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl)-, (5S)-, 5-xy7noxy-1-(4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl)-3-decanone 6-Gingerol
Guanylin, humanPro-Gly-Thr-Cys-Glu-Ile-Cys-Ala-Tyr-Ala-Ala-Cys-Thr- Gly-Cys(Disulfide bridge: Cys4-Cys12, Cys7-Cys15)
β- Amyloid (2-40)Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
[Pro18, Asp21] β-Amyloid (17-21), iAb5Leu-Pro-Phe-Phe-Asp
BNP-45 ,ratSer-Gln-Asp-Ser-Ala-Phe-Arg-Ile-Gln-Glu-Arg-Leu-Arg-Asn-Ser-Lys-Met-Ala-His-Ser-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gln-Lys-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Val-Ser-Arg-Leu-Gly-Cys-Asp-Gly-Leu-Arg-Leu-Phe (Disulfide bridge:Cys23-Cys39)
Pancreatic Polypeptide (31-36) (human)Leu-Thr-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2
定影粉1袋特點清乙酸乙酯etxyl cyanoacetateAR500mL
MD55-7透析袋(半周長55mm,直徑35mm,截留分子量7000Da) 5米/卷0
U0975-5gUredine 尿苷58-96-85g
DNA Marker V250ul
L-Isoleucine50g
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