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DAB 法*雜交試劑盒5次保存

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更新時間:2017-07-17 12:50:39瀏覽次數(shù):151次

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DAB 法*雜交試劑盒5次保存一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

DAB 法*雜交試劑盒5次保存使用方法:

一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37
反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
DAB 法*雜交試劑盒5次保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
DAB 法*雜交試劑盒5次保存步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)ELISA試劑盒 ,英文名: SCD ELISA Kit

Mouse ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒

MouseNeurotrophin3,NT-3ELISAkit 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanelectron-transfer-flavoproteinbetapolypeptide,ETFBELISAKit人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽規(guī)格:48T/96T

細胞3--3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶比色法定量檢測試劑盒20

ELISAKitAPC大鼠活化蛋白C規(guī)格:48T/96T
小鼠VI型膠原(COL6)ELISA試劑盒 ,英文名: COL6 ELISA Kit

人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物(Hb-AGE)ELISA檢測試劑盒Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGEELISAKit 96T/48T

大鼠肌質(zhì)網(wǎng)膜鈣ATP(SERCA)免疫試劑盒 Rat Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 3 ELISA Kit

英文名稱RatCCL11ELISAKit大鼠CCL11規(guī)格:96T/48T

蘭花Vacin&Went培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

ELISAKit-Ag人*Ⅷ相關(guān)抗原規(guī)格:48T/96T
小鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human leptin (LEP) ELISA Kit 人瘦素(LEP)ELISA試劑盒

HumanleukotrieneE4,LT-E4ELISAKit 人白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanAnti-ThyroidMicrosomeAntibody,ATMA/TMABELISA試劑盒人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

植物性食物樣品處理試劑盒20

humantransfusiontransmittedvirus,TTVELISAKit人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒((TTV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
9-OxoODE 25 ug     9-oxo-10E,12Z-octadecadienoic acid 9-KODE; 9-OxoODE

PF-04620110 25 mg     trans-4-[4-4-amino-7,8-dixy7no-5-oxopyrimido[5,4-f][1,4]oxazepin-65H-ylpxenyl]-cyclohexaneacetic acid

Rhod-FF, 三鈉鹽     Rhod-FF, tripotewwium salt

Palmiaidic Acid 100 mg     9E-hexadecenoic acid 9-trans-Hexadecenoic acid; Palmiaidic Acid

Dihomo-γ-Linolenic Acid 50 mg     8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid DGLA; Dihomo-γ-Linolenic Acid

Pen-Strep solution     EZSolution Penicillin/Streptomycin Sterile-Filtered 100X
Growth Hormone Releasing Factor, GRF (1-44), amide, bovineTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Lys-Val-Arg-Leu-NH2

β- Amyloid (11-22)Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu

[Phe2, Nle4]-ACTH (1-24)Ser-Phe-Ser-NLE-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro

Biotinyl-MCH (salmon)Biotin-Asp-Thr-Met-Arg-Cys-Met-Val-Gly-Arg-Val-Tyr-Arg-Pro-Cys-Trp-Glu-Val (Disulfide bridge:Cys5-Cys14)

PACAP-38, amide, frogHis-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Ile-Lys-Asn-Lys-NH2
DAB 法*雜交試劑盒5次保存N,N-二甲基乙醇胺N,N-DimetxylethanolamineCP500mL

MD34-14透析袋(半周長34mm,直徑22mm,截留分子量14000Da)500英尺(152.4)0

10695-039PHYTAGAR 植物瓊脂

D15000 DNA Marker250ul

*1g

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