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更新時間:2017-07-17 12:43:26瀏覽次數(shù):278次
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一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
小牛胸腺 DNA 溶液1mL說明書詳細說明書:
小牛胸腺 DNA 溶液1mL說明書確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
小牛胸腺 DNA 溶液1mL說明書步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)ELISA試劑盒 ,英文名: IDH1 ELISA Kit
Mouse leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒
MouseSolubleClusterofdifferentiation40ligand,sCD40LELISAKit 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumandesmin,DesELISAKit人結(jié)蛋白規(guī)格:48T/96T
細胞Akt1/PKBa激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20/50/100
ELISAKitNF-κBp65大鼠核因子-κB亞基p65親和肽規(guī)格:48T/96T
大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 ,英文名: GIP ELISA Kit
人血清素/血清胺(ST)ELISA檢測試劑盒HumanSerotonin,SISAKit 96T/48T
魚葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)免疫試劑盒 Fish glucose-6-phosphatase,G6PC ELISA kit
CLIAKitforPF/PFP(HumanPerforin/Pore-formingprotein)ELISAKit人穿孔素/成孔蛋白規(guī)格:48T/96T
食物維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitE3人雌三醇規(guī)格:48T/96T
小鼠骨堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒
Humangastricinhibitorypolypeptide,GIPELISAKit 人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-ribonucleoproteinAntibody,RNP-AbELISA試劑盒人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細胞原生質(zhì)體化學轉(zhuǎn)染試劑盒10次
HumanTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
15(S)-HEDE (100 ug) 15S-xy7noxy-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15(S)-HEDE
α-(difluorometxyl)-DL-Arginine (10 mg) DFMA|RMI 71897; 2-(difluorometxyl)arginine
DEAC-dUTP 溶解于1 mM Tris緩沖液(pH 7。5) DEAC-dUTP 1 mM in Tris Buffer (pH 7。5)
Tricosanoyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tricos*; Tricosanoyl Ethanolamide
5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide (10 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-5Z,8Z,11Z-eicosatrienamide; Mead Acid Ethanolamide; 5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide
1- Dantrolene wo7ium
gp100 (619-627)Arg-Leu-Met-Lys-Gln-Asp-Phe-Ser-Val
α-Conotoxin SIATyr-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Phe-Asp-Cys-NH2 (Disulfide bridge: Cys2 -Cys7,Cys3 - Cys13)
[Nle10]-Neurokinin A (4-10)Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Nle-NH2
Biotin-MBP(94-102)Biotin -Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg
p60 v-src (137-157)Val-Ala-Pro-Ser-Asp-Ser-Ile-Gln-Ala-Glu-Glu-Trp-Tyr-Phe-Gly-Lys-Ile-Thr-Arg-Arg-Glu
小牛胸腺 DNA 溶液1mL說明書錄本ChlorobenzeneAR500mL
DF009DuRed(效果同GelRed)核酸染料(10,000× 水溶液)500ul0
A0332-10GAlbumin Bovine,Fraction V 牛血清白蛋白(五組分)9048-46-810g
酵母質(zhì)粒提取試劑盒50T
L-Cysteine, xy7nochloride, Monohydrate100g
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