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    細(xì)胞膜染色試劑 Deep Red Dye 500ul實(shí)驗(yàn)方法

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    更新時間:2017-07-07 11:49:29瀏覽次數(shù):1041次

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    細(xì)胞膜染色試劑 Deep Red Dye 500ul實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
    1、液的配制:
    六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
    2、陽性對照的設(shè)置:
        把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
    3、對于懸浮細(xì)胞:
    1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
    2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
    3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
    437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
    5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
    6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
    細(xì)胞膜染色試劑 Deep Red Dye 500ul實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
    1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
    2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
    3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
    4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
    5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
    6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
    7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
    VE(人血管內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

    人心肌細(xì)胞cDNAHCM cDNA

    NTRK1 Others Mouse 小鼠 TrkA / NTRK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

    MX-1細(xì)胞,人癌細(xì)胞 豬腎細(xì)胞系,PK-15細(xì)胞 大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

    CL-0269CW-2(人結(jié)腸癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

    HUtMEC Pellet 人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 肌細(xì)胞分離液MDS
    淋巴成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

    GLA Others Mouse 小鼠 alpha-Galactosidase A / GLA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

    大鼠大隱靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

    GP-293人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line GP-293 DMEM+10% FBS

    IFNA13 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA13 / Interferon alpha-13 蛋白 (His 標(biāo)簽)

    HOS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 01群霍亂弧菌
    IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

    人顱骨造骨細(xì)胞裂解物HCOL

    小鼠淋巴瘤細(xì)胞;EL4

    LX-2細(xì)胞,人肝星形細(xì)胞正常 人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞,HFSF細(xì)胞 家貓肺細(xì)胞;FCA-L2

    LoVo(人大腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

    Promocell C-21110 Mammary Epithelial Cell GrowthMedium KIT, 上皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml
    大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒 Human Cytotoxin-associated protein,CagA ELISA Kit

    乙酰*酯酶(AchE)測試盒 可見分光光度法 50/48

    RatParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISA試劑盒大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    HumanImmuneRNA,IrnaELISA試劑盒人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    HumanMatrixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
    豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    Neonatal rat thyroxine (NN-T4) ELISA Kit 大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒

    Humangrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 人生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

    HumanCrosslaps,CrELISA試劑盒人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    組織DYRK1A激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

    humanProstaglandinFPG-FELISAKit人前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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    人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

    人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

     

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