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更新時間:2017-07-07 11:49:12瀏覽次數(shù):1645次
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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實驗方法
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細(xì)胞膜染色試劑 CM-Dil 200ul免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞膜染色試劑 CM-Dil 200ul免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
TG-905(人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人晶狀體上皮細(xì)胞cDNAHLEpiC cDNA
IL17RB Others Mouse 小鼠 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
LCC1細(xì)胞,人癌細(xì)胞 VERO衍生株,SVP細(xì)胞 成骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CL-0278HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HPMEC Pellet 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 多聚賴氨酸 1 mg/mlPLL
狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL1
GLIPR1 Others Mouse 小鼠 GLIPR1 / RTVP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
破骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
Cyc-tAg細(xì)胞,小鼠T淋巴細(xì)胞瘤(SV40T抗原轉(zhuǎn)染) 人卵巢癌*耐藥株,A2780/Taxol細(xì)胞 人肺動脈成纖維細(xì)胞裂解物HPAFL
非洲綠猴腎細(xì)胞;GL-37
IGF1R Others Human 人 IGF1R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人淋巴細(xì)胞;1301
CM-H009人支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
SW480細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,MV3細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao
HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
AZU1 Others Human 人 AZU1 / Azurocidin 1 / HBP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠前動力蛋白2(PROK2)ELISA試劑盒 ,英文名: PROK2 ELISA Kit
人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA檢測試劑盒HumancytotoxicTlymphocyteassociatedantigen4,CTLA-4ELISAKit 96T/48T
魚*(NE)免疫試劑盒 Fish norepinephrine,NE ELISA kit
CLIAKitforPF-3ELISAKit大鼠血小板因子3規(guī)格:48T/96T
食物糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitTSHR人促甲狀腺激素受體抗體規(guī)格:48T/96T
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human aconitase 2 (ACO-2) ELISA Kit 人烏頭酸酶2(ACO-2)ELISA試劑盒
HumanNoradrenalineBitartas,NE-BELISAKit 人重*(NE-B)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumancrosslinkedN-opeptideoftypeⅠcollagen,NTXELISA試劑盒人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次
HumanProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit人前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)胞膜染色試劑 CM-Dil 200ul免費代測人抗肌動蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗環(huán)胍酸肽抗體(CCP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSVIgM)ELISA試劑盒 48T/96T 試劑盒 組裝/原裝
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