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caspase-8染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法

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更新時間:2017-07-07 11:47:07瀏覽次數(shù):396次

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caspase-8染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法PA319(人大腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人口腔角質(zhì)細(xì)胞總RNAHOK tRNA

IL1R2 Others Human IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

MDA-MB-415細(xì)胞,人癌細(xì)胞 鼠胚成纖維細(xì)胞系,STO細(xì)胞 原代成纖維細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml

CL-0334EB-3(Burkitt淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HDLEC Pellet 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊(少年者) > 1 mio.cells 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長添加物OPCGS

caspase-8染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
caspase-8染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
caspase-8染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer
MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細(xì)胞

GPC3 Others Mouse 小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人正常前列腺上皮細(xì)胞;RWPE-1

狗腎細(xì)胞隆突型;MDCK superdome T細(xì)胞,CTLL-2細(xì)胞 RTE細(xì)胞,大鼠氣管上皮細(xì)胞

人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]

HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
LAG3 Others Rat 大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人類原巨核細(xì)胞型白血病細(xì)胞;UT-7

CM-R026大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

MKN-45細(xì)胞,人低分化胃癌細(xì)胞 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)C細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2

CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

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