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甘油-*染色液100ml實驗方法

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更新時間:2017-07-07 11:36:54瀏覽次數(shù):162次

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甘油-*染色液100ml實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
甘油-*染色液100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
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D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人羊膜細(xì)胞;HA

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

SW-13細(xì)胞,人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 豬細(xì)胞系(ST),ST細(xì)胞 CL-0422RBL-1(大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系

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CM-H044人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

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IL15 Protein Human 重組人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(HM) ( 5×105 ) 人海馬神經(jīng)元 Human
CAT Others Human CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

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人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)免疫試劑盒 Human MEPE ELISA Kit

過氧化物酶(POD)測試盒 可見分光光度法 50/48

Ratnitricoxide,NOELISA試劑盒大鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanhistoneH2A-H2B-DNAautoantibodyELISA試劑盒人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit人巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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